24小时热门版块排行榜    

查看: 469  |  回复: 5
当前主题已经存档。

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] 倒换质粒载体流程求助~~

刚刚接触基因工程,课题与原核表达相关,指导教师提示我需要将载体PET32a上一段融合基因倒换到PQE30上,大概的说了一些酶切位点选择方面等等一些问题,我已经记不清楚了,希望大家能帮帮我,提供些资料,还有我要是最近开始实验,这几天应该恶补那方面的知识呢,谢谢大家,对于给我帮助大的人,给予10G奖励。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


jiangkuo0520(金币+1,VIP+0): 11-23 18:51
你导师意思大概是,选择合适的酶切位点将载体PET32a上的目的基因切下连到载体PQE30上,所选择的酶切位点应该在这两个载体上都存在,且不能让让基因出现移位。看看基因工程或者分子克隆。

[ Last edited by susizheng on 2009-11-23 at 18:41 ]
Thank-you,so-blue.
2楼2009-11-23 18:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

不知道有没有人做过啊,我想知道些具体过程啊,谢谢大家!
3楼2009-11-23 18:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

继续等专家们指点~
4楼2009-11-23 20:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jiangkuo0520(金币+9,VIP+0):谢谢你 11-24 08:23
基本步骤是:
1、连有你目的基因的PET32a双酶切,电泳,回收目的片段。电泳检测回收片段的浓度。
2、载体PQE30双酶切,电泳,回收。电泳检测回收载体浓度。
3、针对回收的目的片段和载体的浓度选择合适的量进行连接。
4、连接产物转化感受态DH5a,涂板,做蓝白斑筛选。
5、挑白斑做菌液pcr鉴定,筛选阳性克隆。
6、保险起见,提质粒做双酶切鉴定,测序。
多看看书,向做过的师兄师姐多请教。
Thank-you,so-blue.
5楼2009-11-23 21:35:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-11-23 21:35:
基本步骤是:
1、连有你目的基因的PET32a双酶切,电泳,回收目的片段。电泳检测回收片段的浓度。
2、载体PQE30双酶切,电泳,回收。电泳检测回收载体浓度。
3、针对回收的目的片段和载体的浓度选择合适的量进行 ...

好详细,谢谢了,新人就是需要这样的指导!
6楼2009-11-24 08:23:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangkuo0520 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 263求调剂 +5 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 10:23 by 呆呆师姐
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +3 jiajunX 2026-03-22 3/150 2026-03-22 19:32 by brblmd
[考研] 293求调剂 +12 zjl的号 2026-03-16 17/850 2026-03-22 16:51 by i_cooler
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 305分求调剂(食品工程) +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 材料学学硕080502 337求调剂-一志愿华中科技大学 +4 顺顺顺mr 2026-03-18 5/250 2026-03-21 10:22 by luoyongfeng
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +7 困于星晨 2026-03-17 9/450 2026-03-20 17:38 by 无懈可击111
[考研] 085601专硕,总分342求调剂,地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
信息提示
请填处理意见