24小时热门版块排行榜    

查看: 735  |  回复: 7
当前主题已经存档。

yyongl-168

木虫 (正式写手)

[交流] 为什么Touchdown有条带,梯度没有条带?

以反转的cDNA为模板,18s在56度很容易P出条带,目的基因用Touchdown程序能P出条带,且很亮,降落的最高温度为64度,最低温度为44度,但如果用梯度PCR,温度同样从64度到44度,每隔两度一个梯度,结果没有目的条带出现,即使有,也是很弱很弱的带,且不稳定,另外,引物是根据网上的基因组序列设计的特异引物,请高手告之原因和解决方法,谢谢了!

[ Last edited by amisking on 2009-11-25 at 17:18 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-23 18:11
只能说,每隔两度一个梯度,这个梯度太大了。在出现目的条带的温度范围内再设置比较小的温度梯度试试。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-11-23 14:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyongl-168

木虫 (正式写手)

我试试,谢谢!
3楼2009-11-24 09:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
TOUCH DOWN出来就用就可以了啊
至于gradient 你能做几个梯度啊 减少在10度范围内做几个试试
4楼2009-11-24 09:55:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyongl-168

木虫 (正式写手)

因为是半定量试验,所以我认为确定一个最佳的退火温度是必要的,现在就试试把梯度拉小点,看行不行
5楼2009-11-25 16:59:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyongl-168

木虫 (正式写手)

问题已经解决,是因为我的基因含量太低,要增加循环数才能看见,看来Touchdown结合模板的能力要比特定温度PCR要强啊
6楼2009-12-02 22:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
半定量不准的哦,如果你是为了后续做出结果,不如直接做实时定量或者northern blot
7楼2009-12-03 08:19:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyongl-168

木虫 (正式写手)

我先只想看个大致的趋势,再决定做后面的
8楼2009-12-04 09:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yyongl-168 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +5  ̄^ ̄゜汗 2026-03-19 7/350 2026-03-22 19:44 by 公瑾逍遥
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +3 酥酥鱼.. 2026-03-21 3/150 2026-03-22 11:31 by 杨杨杨紫
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
请填处理意见