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yyongl-168

木虫 (正式写手)

[交流] 为什么Touchdown有条带,梯度没有条带?

以反转的cDNA为模板,18s在56度很容易P出条带,目的基因用Touchdown程序能P出条带,且很亮,降落的最高温度为64度,最低温度为44度,但如果用梯度PCR,温度同样从64度到44度,每隔两度一个梯度,结果没有目的条带出现,即使有,也是很弱很弱的带,且不稳定,另外,引物是根据网上的基因组序列设计的特异引物,请高手告之原因和解决方法,谢谢了!

[ Last edited by amisking on 2009-11-25 at 17:18 ]
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
半定量不准的哦,如果你是为了后续做出结果,不如直接做实时定量或者northern blot
7楼2009-12-03 08:19:42
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-23 18:11
只能说,每隔两度一个梯度,这个梯度太大了。在出现目的条带的温度范围内再设置比较小的温度梯度试试。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-11-23 14:04:20
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heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
TOUCH DOWN出来就用就可以了啊
至于gradient 你能做几个梯度啊 减少在10度范围内做几个试试
4楼2009-11-24 09:55:26
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yyongl-168

木虫 (正式写手)

因为是半定量试验,所以我认为确定一个最佳的退火温度是必要的,现在就试试把梯度拉小点,看行不行
5楼2009-11-25 16:59:02
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