24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 784  |  回复: 7
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yyongl-168

木虫 (正式写手)

[交流] 为什么Touchdown有条带,梯度没有条带?

以反转的cDNA为模板,18s在56度很容易P出条带,目的基因用Touchdown程序能P出条带,且很亮,降落的最高温度为64度,最低温度为44度,但如果用梯度PCR,温度同样从64度到44度,每隔两度一个梯度,结果没有目的条带出现,即使有,也是很弱很弱的带,且不稳定,另外,引物是根据网上的基因组序列设计的特异引物,请高手告之原因和解决方法,谢谢了!

[ Last edited by amisking on 2009-11-25 at 17:18 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyongl-168

木虫 (正式写手)

问题已经解决,是因为我的基因含量太低,要增加循环数才能看见,看来Touchdown结合模板的能力要比特定温度PCR要强啊
6楼2009-12-02 22:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-23 18:11
只能说,每隔两度一个梯度,这个梯度太大了。在出现目的条带的温度范围内再设置比较小的温度梯度试试。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-11-23 14:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
TOUCH DOWN出来就用就可以了啊
至于gradient 你能做几个梯度啊 减少在10度范围内做几个试试
4楼2009-11-24 09:55:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyongl-168

木虫 (正式写手)

因为是半定量试验,所以我认为确定一个最佳的退火温度是必要的,现在就试试把梯度拉小点,看行不行
5楼2009-11-25 16:59:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +5 苦命人。。。 2026-04-18 6/300 2026-04-19 12:04 by 手机用户
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 291求调剂 +10 关忆北. 2026-04-14 10/500 2026-04-18 23:32 by 路病情
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 化学070300 求调剂 +29 哈哈哈^_^ 2026-04-12 29/1450 2026-04-18 15:56 by Equinoxhua
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +6 随心所欲☆ 2026-04-15 7/350 2026-04-15 21:45 by lbsjt
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
信息提示
请填处理意见