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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)

[交流] 有用三氯乙酸沉淀分离蛋白的吗?需要多大的浓度?

有用三氯乙酸沉淀分离蛋白的吗?需要多大的浓度?
我的样品粘度很大,想从样品中把蛋白分离出来,用的TCA法沉淀的,但是沉淀不完全,请问高手TCA的浓度一般需要多大啊,像我们这粘度较大的样品需要多大啊!
另外像我们这种样品有其他好的分离蛋白的方法么?
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qingfengwu

金虫 (小有名气)


woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):恩,我这也是微量蛋白,大概含量约0.1%左右 11-23 11:55
三氯乙酸沉淀我们也有用的,但是都是分离微量蛋白的,比如检测一些细胞或活组织的分泌因子什么的,就用三氯乙酸沉淀下来,进行浓缩。对于一般的样品,没有什么必要用这种沉淀方法。如果你确实需要的话,我会去查一下我的试验记录本再告诉你。
3楼2009-11-23 11:46:55
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qingfengwu

金虫 (小有名气)


woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):样品本身粘度就很大 11-23 11:53
你的样品粘度很大,表明很可能已经被DNA污染了,导致粘度很大,纯蛋白绝大多数情况下是不会粘稠的,至少我从来没有遇到过。
2楼2009-11-23 11:41:57
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qingfengwu

金虫 (小有名气)


woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢,我的样品本身就是粘度很大,和蛋白没关系,并且蛋白含量很低,如果直接用lowry法测定,里面有影响测定的粒子,就是亚硫酸根离子,影响测定,所以,我只能把蛋白沉淀分离出来再测定,这也是没有办法的办法了 11-23 11:53
三氯乙酸10%-15%这种浓度就可以了,不要太高了。对不起TCA法没有用过。

你是不是先13000rpm 15min把可能的DNA污染离心下来。再看看你的蛋白是否还粘稠。我觉得不太可能。
4楼2009-11-23 11:49:52
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)

我是用TCA(三氯乙酸)-Doc(脱氧胆酸钠)法做的
我们的离心机最多能达到一万,应该可以吗?
5楼2009-11-23 11:57:43
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