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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有用三氯乙酸沉淀分离蛋白的吗？需要多大的浓度？
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)

[交流] 有用三氯乙酸沉淀分离蛋白的吗？需要多大的浓度？

有用三氯乙酸沉淀分离蛋白的吗？需要多大的浓度？
我的样品粘度很大，想从样品中把蛋白分离出来，用的TCA法沉淀的，但是沉淀不完全，请问高手TCA的浓度一般需要多大啊，像我们这粘度较大的样品需要多大啊！
另外像我们这种样品有其他好的分离蛋白的方法么？
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1楼 2009-11-23 11:29:45
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qingfengwu

金虫 (小有名气)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):样品本身粘度就很大 11-23 11:53
你的样品粘度很大，表明很可能已经被DNA污染了，导致粘度很大，纯蛋白绝大多数情况下是不会粘稠的，至少我从来没有遇到过。
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2楼2009-11-23 11:41:57
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qingfengwu

金虫 (小有名气)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):恩，我这也是微量蛋白，大概含量约0.1%左右 11-23 11:55
三氯乙酸沉淀我们也有用的，但是都是分离微量蛋白的，比如检测一些细胞或活组织的分泌因子什么的，就用三氯乙酸沉淀下来，进行浓缩。对于一般的样品，没有什么必要用这种沉淀方法。如果你确实需要的话，我会去查一下我的试验记录本再告诉你。
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3楼2009-11-23 11:46:55
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qingfengwu

金虫 (小有名气)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢，我的样品本身就是粘度很大，和蛋白没关系，并且蛋白含量很低，如果直接用lowry法测定，里面有影响测定的粒子，就是亚硫酸根离子，影响测定，所以，我只能把蛋白沉淀分离出来再测定，这也是没有办法的办法了 11-23 11:53
三氯乙酸10％－15％这种浓度就可以了，不要太高了。对不起TCA法没有用过。

你是不是先13000rpm 15min把可能的DNA污染离心下来。再看看你的蛋白是否还粘稠。我觉得不太可能。
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4楼2009-11-23 11:49:52
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)
我是用TCA（三氯乙酸）-Doc（脱氧胆酸钠）法做的
我们的离心机最多能达到一万，应该可以吗？
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5楼2009-11-23 11:57:43
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