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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 阴性PCR问题！
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grief

铜虫 (初入文坛)

[交流] 阴性PCR问题！

最近做质粒的构建，其中有个启动子的替换，把启动子换为ADH的启动子，ADH1导入进去了，而ADH-TT这个终止子在做菌落PCR鉴定时，阴性对照一直出现 和目的条带在同一条线的条带，就是比加了模板的要淡些。
   现已经排除试剂的污染和无菌操作有问题的可能。因为我把实验试剂都换了个遍，连操作的人都换过，结果还是一样。
   不过更不明白的是我把阴性对照的水换为自来水却没有条带的出现。这是因为超纯水的原因吗？那为什么用其他差不多的条带的DNA为模板PCR扩增时，却没有这个问题。

[ Last edited by amisking on 2009-11-22 at 12:05 ]
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等待秋天
1楼 2009-11-22 10:50:07
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xtaqo045

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用超纯水并灭菌后再用呢，试试吧，操作不能有任何污染
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3楼2009-11-22 17:50:42
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从你换水来看，水被污染了吧？污染了模板或者你的产物。
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2楼2009-11-22 16:50:44
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grief

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by xtaqo045 at 2009-11-22 17:50:
用超纯水并灭菌后再用呢，试试吧，操作不能有任何污染

我直接用水PCR也有条带出现，引物都换了2次了，水也换了，也高压灭菌过了，改用其他的引物用水做模板却很正常了。
我都郁闷死了，就这个片段难了我2个月了！
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等待秋天
4楼2009-11-22 18:39:36
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