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grief

铜虫 (初入文坛)

[交流] 阴性PCR问题!

最近做质粒的构建,其中有个启动子的替换,把启动子换为ADH的启动子,ADH1导入进去了,而ADH-TT这个终止子在做菌落PCR鉴定时,阴性对照一直出现 和目的条带在同一条线的条带,就是比加了模板的要淡些。
   现已经排除试剂的污染和无菌操作有问题的可能。因为我把实验试剂都换了个遍,连操作的人都换过,结果还是一样。
   不过更不明白的是我把阴性对照的水换为自来水却没有条带的出现。这是因为超纯水的原因吗?那为什么用其他差不多的条带的DNA为模板PCR扩增时,却没有这个问题。

[ Last edited by amisking on 2009-11-22 at 12:05 ]
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等待秋天
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从你换水来看,水被污染了吧?污染了模板或者你的产物。
2楼2009-11-22 16:50:44
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xtaqo045

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用超纯水并灭菌后再用呢,试试吧,操作不能有任何污染
3楼2009-11-22 17:50:42
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grief

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by xtaqo045 at 2009-11-22 17:50:
用超纯水并灭菌后再用呢,试试吧,操作不能有任何污染

我直接用水PCR也有条带出现,引物都换了2次了,水也换了,也高压灭菌过了,改用其他的引物用水做模板却很正常了。
我都郁闷死了,就这个片段难了我2个月了!
等待秋天
4楼2009-11-22 18:39:36
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