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mandy992

新虫 (初入文坛)

[交流] 克隆后出现了非特异条带

用的peasy-t1载体,kana抗生素。片段四百多,结果克隆后菌液pcr跑电泳,出来了两条带,一个600多,一个1100多,望大家指教~

[ Last edited by amisking on 2009-11-21 at 22:49 ]
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xiangao

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
do control experiment
2楼2009-11-22 13:10:13
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
原因很多,如菌落不纯,引物专一性差等。
但愿人长久
3楼2009-11-23 08:38:50
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王雨云

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
也可能是退火温度高了吧
4楼2009-11-23 15:40:55
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neon_alone

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的菌液PCR条件和单独P 的时候条件是不是一样的?做个control insert对照,
5楼2009-11-23 15:47:12
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mandy992

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by neon_alone at 2009-11-23 15:47:
你的菌液PCR条件和单独P 的时候条件是不是一样的?做个control insert对照,

条件不同,因为引物不一样。。。恩,好主意
6楼2009-11-24 08:46:19
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mandy992

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 王雨云 at 2009-11-23 15:40:
也可能是退火温度高了吧

退火温度高会出现非特异?你是想说低吗
7楼2009-11-24 08:48:18
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王雨云

金虫 (小有名气)

嗯,说反了,呵呵!
8楼2009-11-24 10:21:30
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neon_alone

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该用相同的引物啊,你用你单独P的时候那个引物试试,
你用的通用引物,肯定片段会比目的片段大的吧,吧整个MCS上的序列都进去了,是吧?。
9楼2009-11-24 10:41:21
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

你可以加一个空质粒对照,或者感受态菌的对照,有时候是你引物把这些扩出来而已,只要目的条带有就行了
10楼2009-11-24 12:02:50
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