| 查看: 1606 | 回复: 1 | |||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者加油努力ls要用两湍� 18 个金币 | |||
[求助]
求助！包涵体纯化！怎样做？
|
|||
|
包涵体纯化过程中，变性液加到复性液中（1:10）加入无蛋白沉淀，之后以1:20加入到binding buffer中进行镍柱纯化上样，蛋白析出严重。 为了解决这个办法尝试了透析复性，由于复性液中尿素浓度已经降低到0.3M了，蛋白还是会析出。后离心取上清，跑胶验证有目的蛋白，后以1:20上样纯化，但是洗脱过程无蛋白峰，进行的线型洗脱咪唑浓度500mM，反而在最后一步平衡时会出现蛋白峰，也没有目的蛋白？那蛋白究竟去哪了？ 以及如果进行蛋白柱上复性得话。具体柱上复性的buffer配方以及具体操作是怎么样的？因为查阅资料看精氨酸会剥离镍柱中的镍离子，而复性液中又必须包含精氨酸，那怎样进行柱上复性啊？ 如果先纯化变性蛋白呢？也不确定会不会出峰，后续在进行复性。目前所遇到的问题就是蛋白析出，以及纯化不出来。有没有具体的protocol。求助！感谢大家！ @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有133人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
yubeihong
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 7542.8
- 散金: 605
- 红花: 40
- 帖子: 3057
- 在线: 641.1小时
- 虫号: 253258
- 注册: 2006-05-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
2楼2026-09-02 22:53:10