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求助！包涵体纯化！怎样做？
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包涵体纯化过程中，变性液加到复性液中（1:10）加入无蛋白沉淀，之后以1:20加入到binding buffer中进行镍柱纯化上样，蛋白析出严重。 为了解决这个办法尝试了透析复性，由于复性液中尿素浓度已经降低到0.3M了，蛋白还是会析出。后离心取上清，跑胶验证有目的蛋白，后以1:20上样纯化，但是洗脱过程无蛋白峰，进行的线型洗脱咪唑浓度500mM，反而在最后一步平衡时会出现蛋白峰，也没有目的蛋白？那蛋白究竟去哪了？ 以及如果进行蛋白柱上复性得话。具体柱上复性的buffer配方以及具体操作是怎么样的？因为查阅资料看精氨酸会剥离镍柱中的镍离子，而复性液中又必须包含精氨酸，那怎样进行柱上复性啊？ 如果先纯化变性蛋白呢？也不确定会不会出峰，后续在进行复性。目前所遇到的问题就是蛋白析出，以及纯化不出来。有没有具体的protocol。求助！感谢大家！ @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端 |
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