[交流] 如何让检测菌体的DNA或ATP含量已有2人参与

微生物生长的测定方法有多种，根据研究对象或目的选择。

(一)微生物细胞数目的检测方法

1．总细胞计数法   显微镜直接记数法和比浊法

(1)血球计数板法  血球汁数板中央有一个体积一定的计数室( 0.1mm^{3。将菌悬液或孢子悬液在显微镜下计数，然后再按一定公式计算出细菌总数。}

    (2)涂片计数法  将一定体积(0.1ml)的样品，均匀地涂在载片的一定面积内(1cm^{2。在显微镜下计算细胞数量，推算1cm2所含细胞数目。}

（3）比浊法：菌体细胞培养液混浊，在一定范围内，菌体数量与浑浊成正比，故可通过分光光度计或比色计求出浑浊度，通过与标准曲线对比，求出样品中菌液浓度，算出个体数。

特点：所得结果包括死菌和活菌。

2. 活菌计数法（平板菌落记数法）：

是通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌数的方法．故又称平板计数法。

特点：计算的结果是活菌落。

注意：样品稀释度。一个活细胞形成一个菌落。

（1）涂布平板法  用灭菌的涂布器将一定体积(不大于0.1ml)的适当稀释度的菌液涂布在琼脂培养基的表面，然后保温培养有到菌落出现，记录菌落的数目并换算成每毫升试样中的活细胞数量。

（2）倒平板法  将样品稀释到一定浓度，取一定体积(0.1—1ml)倒入冷却至45℃的固体培养基混合，制成平板，培养后，出现菌落，由菌落数推算出的菌总数。

3 滤膜过滤法：样品同过微孔滤膜后，细菌收集在滤膜上，然后将滤膜放在培养基中培养，通过菌落计数求出样品活菌落。

  (二)微生物生长量和生理指标的测定方法

测定微生物生长量及相关的生理指标，常用以下方法：

1．湿重法：将单位体积微生物培养液离心，收集沉淀物，然后再称重。

2．干重法：将离心得到的细胞沉淀物，置于100---105℃的烘箱中干燥过夜除去水分，然后再称重。

特点：适合与菌体浓度高的样品。表示菌体生长量。

3、测定细胞内菌种化学成分：方法难，操做困难，但较准确。

细胞内菌种化学成分多少（∝），反映群体中菌体数量的多少。

（1）    测定含氮量：N在细胞内稳定，测定总N量，粗蛋白=N*6.25g。

（2）    测定DNA：微生物细胞DNA含量稳定，采用荧光指示剂或染色剂与菌体DNA作用荧光比色或分光光度法测得DNA的含量。

（3）    其他生理指标：如测定碳、磷、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)的含量等。

   (二)丝状微生物菌丝长度的测定方法

    对于丝状微生物。特别是丝状真菌，通常是通过测定菌丝的长度变化来反映它们的生长速率。方法有：

    1．培养基表面菌体生长速率测定法

    主要测定一定时间内在琼脂培养基表面的菌落直径的增加值。

    2．培养料中菌体速率测定法

主要测定一定时间内在固体培养料中菌丝体向前延伸的距离。

如：栽培食用菌的培养料。

    3．单个菌丝顶端生长速率测定法