24小时热门版块排行榜    

查看: 810  |  回复: 11
当前主题已经存档。

09021122

木虫 (正式写手)

[交流] 克隆注意!

克隆注意几点

说说我的实验经验:
1:在做克隆实验时感受态细胞不能反复冻融,最好再感受态细胞制备好后分装成小分,在做实验时拿出一份即可。
2:配连接体系时不一定要按照书上的说的十微升的体系,只要结果很好,用少的体系也无妨,我用的就是2.5微升的体系,效果非常好,这样可以省很多费用。
3:在涂平板时加的X-gal和IPTG一定要是现配的,不然的话可能会长不出菌,如果加Amp的话。
4:在涂平板时最好设置一个梯度,即加菌液的体积要有一个梯度,而且最好留一部分菌液保存起来,以备后用。
等等吧,以上只是我在实验时遇到的一些问题和看法,希望对大家有用处!
回复此楼

» 猜你喜欢

雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙井茶室

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
求2.5ul酶连体系
2楼2009-11-19 13:34:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逆水而行

银虫 (正式写手)

谢谢,受教
快乐人生快乐生活
3楼2009-11-19 13:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zier1011

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主,请教一下,IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢,还是涂布到平板表面呢?
我们实验室一直是涂在平板表面,我想问问,配到培养基中不行吗?涂到表面是出于什么考虑,仅仅是从成本考虑吗?——IPTG和X-Gal都比较贵。
花还香香的
4楼2009-11-19 13:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chjvke

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也想知道2.5ul的体系,还想知道你设涂的菌液梯度时,一般设几个,不离心后涂吗?
5楼2009-11-19 14:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主,请教一下,IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢,还是涂布到平板表面呢?
我们实验室一直是涂在平板表面,我想问问,配到培养基中不行吗?涂到表面是出于什么考虑,仅仅是从成本考虑吗?——IPTG和X-Gal都比 ...

你怎么搞都一样啊 反正你最终算的浓度都差不多
你如果做x-gal板的话得避光保存
6楼2009-11-19 15:01:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

~明晓溪~

木虫 (正式写手)

先学习下,谢谢!~
7楼2009-11-19 15:55:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09021122

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主,请教一下,IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢,还是涂布到平板表面呢?
我们实验室一直是涂在平板表面,我想问问,配到培养基中不行吗?涂到表面是出于什么考虑,仅仅是从成本考虑吗?——IPTG和X-Gal都比 ...

是涂在平板上的,它有浓度的限制,如果直接混合于培养基中,不但浓度不同,
而且效果不一定好。两种试剂的价格很高,所以一般还是涂于表面。
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
8楼2009-11-19 18:10:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09021122

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by chjvke at 2009-11-19 14:01:
我也想知道2.5ul的体系,还想知道你设涂的菌液梯度时,一般设几个,不离心后涂吗?

一般三四个就行了  因为设梯度只是为了细菌长的好坏,没有必要非得具体的设多少。
2.5微升体系 只是我实验时的数据,是为了节约成本。
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
9楼2009-11-19 18:13:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

谢谢楼主分享
10楼2009-11-19 18:36:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 09021122 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工考研调剂 +3 孅華 2026-03-22 3/150 2026-03-23 11:20 by barlinike
[考研] 考研化学308分求调剂 +5 你好明天你好 2026-03-23 6/300 2026-03-23 11:02 by 素颜倾城1988
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 293求调剂 +12 zjl的号 2026-03-16 17/850 2026-03-22 16:51 by i_cooler
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
信息提示
请填处理意见