应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆注意！
121/2返回列表12下一页
查看: 849  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

09021122

木虫 (正式写手)

[交流] 克隆注意！

克隆注意几点

说说我的实验经验：
1:在做克隆实验时感受态细胞不能反复冻融，最好再感受态细胞制备好后分装成小分，在做实验时拿出一份即可。
2：配连接体系时不一定要按照书上的说的十微升的体系，只要结果很好，用少的体系也无妨，我用的就是2.5微升的体系，效果非常好，这样可以省很多费用。
3：在涂平板时加的X-gal和IPTG一定要是现配的，不然的话可能会长不出菌，如果加Amp的话。
4：在涂平板时最好设置一个梯度，即加菌液的体积要有一个梯度，而且最好留一部分菌液保存起来，以备后用。
等等吧，以上只是我在实验时遇到的一些问题和看法，希望对大家有用处！
回复此楼

» 猜你喜欢
雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
1楼 2009-11-19 11:37:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙井茶室

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
求2.5ul酶连体系
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-11-19 13:34:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逆水而行

银虫 (正式写手)
谢谢，受教
回复此楼
快乐人生快乐生活
3楼2009-11-19 13:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zier1011

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主，请教一下，IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢，还是涂布到平板表面呢？
我们实验室一直是涂在平板表面，我想问问，配到培养基中不行吗？涂到表面是出于什么考虑，仅仅是从成本考虑吗？——IPTG和X-Gal都比较贵。
赞一下(1人) 回复此楼
花还香香的
4楼2009-11-19 13:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chjvke

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也想知道2.5ul的体系，还想知道你设涂的菌液梯度时，一般设几个，不离心后涂吗？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-11-19 14:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主，请教一下，IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢，还是涂布到平板表面呢？
我们实验室一直是涂在平板表面，我想问问，配到培养基中不行吗？涂到表面是出于什么考虑，仅仅是从成本考虑吗？——IPTG和X-Gal都比 ...

你怎么搞都一样啊 反正你最终算的浓度都差不多
你如果做x-gal板的话得避光保存
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-11-19 15:01:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

~明晓溪~

木虫 (正式写手)
先学习下，谢谢！~
赞一下 回复此楼
7楼2009-11-19 15:55:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09021122

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主，请教一下，IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢，还是涂布到平板表面呢？
我们实验室一直是涂在平板表面，我想问问，配到培养基中不行吗？涂到表面是出于什么考虑，仅仅是从成本考虑吗？——IPTG和X-Gal都比 ...

是涂在平板上的，它有浓度的限制，如果直接混合于培养基中，不但浓度不同，
而且效果不一定好。两种试剂的价格很高，所以一般还是涂于表面。
赞一下 回复此楼
雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
8楼2009-11-19 18:10:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09021122

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by chjvke at 2009-11-19 14:01:
我也想知道2.5ul的体系，还想知道你设涂的菌液梯度时，一般设几个，不离心后涂吗？

一般三四个就行了  因为设梯度只是为了细菌长的好坏，没有必要非得具体的设多少。
2.5微升体系 只是我实验时的数据，是为了节约成本。
赞一下 回复此楼
雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
9楼2009-11-19 18:13:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
谢谢楼主分享
回复此楼
10楼2009-11-19 18:36:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 09021122 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 320求调剂 +4 深郊akm 2026-04-17 4/200 2026-04-17 17:32 by 一切OK
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +23 hualkop 2026-04-12 25/1250 2026-04-16 22:12 by SUSE_CL
[考研] 294求调剂 +14 淡然654321 2026-04-15 14/700 2026-04-16 21:01 by lpl364211
[考研] 307中医考研调剂 +6 于以采蘩 2026-04-14 6/300 2026-04-16 16:20 by qingfeng258
[考研] 322求调剂 +8 123安康 2026-04-12 15/750 2026-04-16 11:07 by Espannnnnol
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +4 白云123456789 2026-04-13 4/200 2026-04-16 00:18 by 粉沁若尘
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 食品与营养（0955）271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] B区0809 ，数一英一，290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 339求调剂 +4 hanwudada 2026-04-12 4/200 2026-04-13 12:03 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭