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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆注意！
汕头大学海洋科学接受调剂
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09021122

木虫 (正式写手)

[交流] 克隆注意！

克隆注意几点

说说我的实验经验：
1:在做克隆实验时感受态细胞不能反复冻融，最好再感受态细胞制备好后分装成小分，在做实验时拿出一份即可。
2：配连接体系时不一定要按照书上的说的十微升的体系，只要结果很好，用少的体系也无妨，我用的就是2.5微升的体系，效果非常好，这样可以省很多费用。
3：在涂平板时加的X-gal和IPTG一定要是现配的，不然的话可能会长不出菌，如果加Amp的话。
4：在涂平板时最好设置一个梯度，即加菌液的体积要有一个梯度，而且最好留一部分菌液保存起来，以备后用。
等等吧，以上只是我在实验时遇到的一些问题和看法，希望对大家有用处！
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
1楼 2009-11-19 11:37:23
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龙井茶室

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
求2.5ul酶连体系
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2楼2009-11-19 13:34:58
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逆水而行

银虫 (正式写手)
谢谢，受教
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快乐人生快乐生活
3楼2009-11-19 13:44:54
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zier1011

木虫 (著名写手)
★
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楼主，请教一下，IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢，还是涂布到平板表面呢？
我们实验室一直是涂在平板表面，我想问问，配到培养基中不行吗？涂到表面是出于什么考虑，仅仅是从成本考虑吗？——IPTG和X-Gal都比较贵。
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花还香香的
4楼2009-11-19 13:46:23
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chjvke

铜虫 (初入文坛)
★
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我也想知道2.5ul的体系，还想知道你设涂的菌液梯度时，一般设几个，不离心后涂吗？
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5楼2009-11-19 14:01:26
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heismeng

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主，请教一下，IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢，还是涂布到平板表面呢？
我们实验室一直是涂在平板表面，我想问问，配到培养基中不行吗？涂到表面是出于什么考虑，仅仅是从成本考虑吗？——IPTG和X-Gal都比 ...

你怎么搞都一样啊 反正你最终算的浓度都差不多
你如果做x-gal板的话得避光保存
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6楼2009-11-19 15:01:33
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~明晓溪~

木虫 (正式写手)
先学习下，谢谢！~
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7楼2009-11-19 15:55:09
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09021122

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主，请教一下，IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢，还是涂布到平板表面呢？
我们实验室一直是涂在平板表面，我想问问，配到培养基中不行吗？涂到表面是出于什么考虑，仅仅是从成本考虑吗？——IPTG和X-Gal都比 ...

是涂在平板上的，它有浓度的限制，如果直接混合于培养基中，不但浓度不同，
而且效果不一定好。两种试剂的价格很高，所以一般还是涂于表面。
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
8楼2009-11-19 18:10:34
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09021122

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by chjvke at 2009-11-19 14:01:
我也想知道2.5ul的体系，还想知道你设涂的菌液梯度时，一般设几个，不离心后涂吗？

一般三四个就行了  因为设梯度只是为了细菌长的好坏，没有必要非得具体的设多少。
2.5微升体系 只是我实验时的数据，是为了节约成本。
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
9楼2009-11-19 18:13:40
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
谢谢楼主分享
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10楼2009-11-19 18:36:38
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