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汕头大学海洋科学接受调剂
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09021122

木虫 (正式写手)

[交流] 克隆注意!

克隆注意几点

说说我的实验经验:
1:在做克隆实验时感受态细胞不能反复冻融,最好再感受态细胞制备好后分装成小分,在做实验时拿出一份即可。
2:配连接体系时不一定要按照书上的说的十微升的体系,只要结果很好,用少的体系也无妨,我用的就是2.5微升的体系,效果非常好,这样可以省很多费用。
3:在涂平板时加的X-gal和IPTG一定要是现配的,不然的话可能会长不出菌,如果加Amp的话。
4:在涂平板时最好设置一个梯度,即加菌液的体积要有一个梯度,而且最好留一部分菌液保存起来,以备后用。
等等吧,以上只是我在实验时遇到的一些问题和看法,希望对大家有用处!
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龙井茶室

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
求2.5ul酶连体系
2楼2009-11-19 13:34:58
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逆水而行

银虫 (正式写手)

谢谢,受教
快乐人生快乐生活
3楼2009-11-19 13:44:54
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zier1011

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主,请教一下,IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢,还是涂布到平板表面呢?
我们实验室一直是涂在平板表面,我想问问,配到培养基中不行吗?涂到表面是出于什么考虑,仅仅是从成本考虑吗?——IPTG和X-Gal都比较贵。
花还香香的
4楼2009-11-19 13:46:23
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chjvke

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也想知道2.5ul的体系,还想知道你设涂的菌液梯度时,一般设几个,不离心后涂吗?
5楼2009-11-19 14:01:26
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heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主,请教一下,IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢,还是涂布到平板表面呢?
我们实验室一直是涂在平板表面,我想问问,配到培养基中不行吗?涂到表面是出于什么考虑,仅仅是从成本考虑吗?——IPTG和X-Gal都比 ...

你怎么搞都一样啊 反正你最终算的浓度都差不多
你如果做x-gal板的话得避光保存
6楼2009-11-19 15:01:33
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~明晓溪~

木虫 (正式写手)

先学习下,谢谢!~
7楼2009-11-19 15:55:09
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09021122

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-11-19 13:46:
楼主,请教一下,IPTG和X-Gal你们是配到培养基中去呢,还是涂布到平板表面呢?
我们实验室一直是涂在平板表面,我想问问,配到培养基中不行吗?涂到表面是出于什么考虑,仅仅是从成本考虑吗?——IPTG和X-Gal都比 ...

是涂在平板上的,它有浓度的限制,如果直接混合于培养基中,不但浓度不同,
而且效果不一定好。两种试剂的价格很高,所以一般还是涂于表面。
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
8楼2009-11-19 18:10:34
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09021122

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by chjvke at 2009-11-19 14:01:
我也想知道2.5ul的体系,还想知道你设涂的菌液梯度时,一般设几个,不离心后涂吗?

一般三四个就行了  因为设梯度只是为了细菌长的好坏,没有必要非得具体的设多少。
2.5微升体系 只是我实验时的数据,是为了节约成本。
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
9楼2009-11-19 18:13:40
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

谢谢楼主分享
10楼2009-11-19 18:36:38
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