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daifeng银虫 (小有名气)
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[交流]
DNA提取的问题
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求助各位虫友，本人提克雷伯杆菌N天了可是一直提不出来，我采用的是CTAB法，步骤如下： 1、过夜培养菌液取1.5毫升装EP管，12000转离心2MIN，弃菌液。 2、菌体加567微升TE,吹打使充分重悬。加30微升 10%SDS,3微升蛋白酶K,37度水浴一小时。 3、加100微升5M氯化钠，80微升CTAB/NaCL溶液，混匀，65度，水浴10MIN。 4、加等体积氯仿/异戊醇，混匀，12000转，离心5MIN。 5、留上清，加等体积的酚：氯仿，混匀，12000转，离心5MIN。 6、留上清，加0.6倍体积的异丙醇，轻轻颠倒混合至看到白色DNA沉淀析出 7、轻轻倒掉异丙醇，DNA沉淀用70%乙醇洗涤 8、12000转离心1MIN，倒掉乙醇，风干使乙醇挥干。 9、加50-100微升无菌水溶解DNA. 可是在第4步离心后，没有分层，只有白色的絮状沉淀悬浮。我加长离心时间也依然如此。不知哪位大侠能指点，不胜感激！ |
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