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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因工程与蛋白表达
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gqc1102

新虫 (小有名气)

[求助] 基因工程与蛋白表达 已有2人参与

为了利用细菌自身的信号分子诱导蛋白表达，而不是IPTG诱导，所以想在质粒的多克隆位点插入自己的“启动子-RBS-目的蛋白-终止子”这个序列，不确定各元件之间需不需要间隔序列。想用的质粒是pET-28a，如果把我的序列插入多克隆位点，目的蛋白的表达是不是由我的启动子控制的？不加IPTG的诱导蛋白会表达吗？求帮助！
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1楼 2026-06-04 11:32:14
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隐约

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种模式一般启动子在宿主里面能够使用，蛋白可以正常表达；另外建议不要在多克隆位点插入启动子，多克隆位点是一些复杂结构，这种结构可能影响启动子强度。
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2楼2026-06-04 16:22:22
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小莲子VIP

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先是元器件之间是需要间隔序列的，你需要为你的转录起始复合物提供空间，同时需要考虑间隔序列长度对二级结构的影响；
核糖体结合位点与起始密码子之间也需要间隔序列，这里的间隔序列长度会影响翻译的效率；
你选择把你的序列插入到的pET-28a质粒的MCS区域，虽然刚好落在T7启动子和终止子之间，但是还是会按照你的这套序列进行正常翻译，IPTG影响的是IacI promoter的作用；
最后是你选择pET-28a这个载体是否考虑到后续需要携带His标签用于蛋白纯化，如果需要的话你的终止子设计的位置需要再考虑考虑
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3楼2026-10-09 17:47:10
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