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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关蛋白质和小分子作用的问题
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tancf

金虫 (小有名气)

[交流] 有关蛋白质和小分子作用的问题

想证明某种药物小分子是作用于我的蛋白质（一种核受体）的，可以通过那些实验来验证？向大家请教！
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1楼 2009-11-18 18:09:46
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tancf

金虫 (小有名气)
没有人做这方面么？
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2楼2009-11-18 21:13:38
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
tancf(金币+2,VIP+0):谢谢~ 11-19 12:12
激光共聚焦
把你的小分子标荧光，处理细胞，然后打孔，靶蛋白用荧光抗体标记
看共定位
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3楼2009-11-18 23:13:22
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
tancf(金币+1,VIP+0):谢谢~ 11-19 12:13
biacore
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4楼2009-11-19 08:13:40
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heismeng

金虫 (小有名气)
★ ★
tancf(金币+2,VIP+0):谢谢~ 11-19 12:13
相互作用的话SPR QCM可以做吧 不太懂哈哈 仅供参考
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5楼2009-11-19 10:36:27
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
tancf(金币+2,VIP+0):非常感谢！ 11-21 12:25
SPR, IP后做质谱，或者用生物素标记化合物，IP后检测蛋白质。
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6楼2009-11-20 11:19:12
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foreverjohn

金虫 (小有名气)
★ ★
tancf(金币+2,VIP+0):非常感谢！ 11-21 12:26
我们实验室就在做这方面的！看你实验室有没有仪器，并且研究这种相互作用最好是用多种方法来证明！如果你有机合成比较熟的话，可以选用交联法或者接上荧光基团共定位，体外的方法有表面等离子共振（SPR）、石英晶体微天平（QCM）、微量热法（Microcalorimetry）、此外生物核磁共振（NMR）、晶体学都可以。
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7楼2009-11-20 12:58:45
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

试验 步骤

★ ★ ★ ★ ★
tancf(金币+5,VIP+0):非常感谢！ 11-21 12:26
（1）共定位：

      化学小分子结合受体做confocal确定共定位是比较困难的，确实是需要交联的，但是具体交联的步骤不太清楚。如果是多肽或者内源性蛋白就容易的多，但是这个是不能证明有结合的，只能证明是有可能在一起。

（2）前面几位的意见非常好，看来都是学药学的，SPR，NMR都是非常好的证明方法，只是听说过，自己没有怎么做过。这些是证明binding所需要的。

（3）上面有个虫子说用生物素标记的方法，这个我觉得敏感性不够高，用同位素标记比较好，

     我们现在做一个配体和一个受体确定两者间的关系有很多种方法，你可以去google一下，或者去查一下教科书，配体受体的定义里面都有好几条，你要一一按照那几条去做，在所有这些方法中最经典的一个试验就是同位素标记试验，然后和你的那个核受体共孵育，然后检测。

（4）有条件的话去做一下受体的结晶，crystal structure的分析对于药物来讲非常重要，解析出来以后，你用计算机计算出核受体的一些口袋结构啊，特殊结构啊，用你的化学小分子的一些基团去比对，看看能不能有效结合上去。

所有这些试验全部完成，相信绝对是个top article。
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8楼2009-11-20 13:14:51
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