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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 纯化表达
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无学论hh

新虫 (初入文坛)

[求助] 纯化表达

我是做β半乳糖苷酶的纯化，我的蛋白是109.9kad二聚体，加完iptg后16℃诱导16h，然后用20mm，50mm，100mm咪唑洗杂，用250mm咪唑洗下目的蛋白，也跑sds-page验证了，但是比酶活很低只有0.3u/mg，刚破碎得到的粗酶液酶活为30u/ml，我看文献中差不多大小的相同的酶，他们是30摄氏度左右培养12-20h，我想会不会是温度的问题我也试了一下，但是发现在20mm咪唑洗脱液中酶活很高，250mm处几乎没有酶活且蛋白含量很低，我接下来该咋办
@天使托 发自小木虫手机客户端
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1楼 2026-04-08 11:22:55
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dkaif

新虫 (初入文坛)
低浓度咪唑有酶活高浓度没有酶活那应该就是咪唑的原因，买根密理博的超滤管浓缩除咪唑就好了
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3楼2026-05-02 06:57:53
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dkaif

新虫 (初入文坛)
有超滤浓缩除咪唑吗，高浓度咪唑可能影响酶活
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2楼2026-05-02 06:56:34
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