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无学论hh

新虫 (初入文坛)

[求助] 纯化表达

我是做β半乳糖苷酶的纯化,我的蛋白是109.9kad二聚体,加完iptg后16℃诱导16h,然后用20mm,50mm,100mm咪唑洗杂,用250mm咪唑洗下目的蛋白,也跑sds-page验证了,但是比酶活很低只有0.3u/mg,刚破碎得到的粗酶液酶活为30u/ml,我看文献中差不多大小的相同的酶,他们是30摄氏度左右培养12-20h,我想会不会是温度的问题我也试了一下,但是发现在20mm咪唑洗脱液中酶活很高,250mm处几乎没有酶活且蛋白含量很低,我接下来该咋办
@天使托 发自小木虫手机客户端
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dkaif

新虫 (初入文坛)

有超滤浓缩除咪唑吗,高浓度咪唑可能影响酶活
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2楼2026-05-02 06:56:34
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dkaif

新虫 (初入文坛)

低浓度咪唑有酶活高浓度没有酶活那应该就是咪唑的原因,买根密理博的超滤管浓缩除咪唑就好了
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3楼2026-05-02 06:57:53
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