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夏末～易科新虫 (小有名气)
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MTT比色法测细胞活力
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MTT比色法测细胞活力 实验方法 接种细胞 ① 用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中； ② 离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数； ③ 细胞稀释至2.5×10?-50×10?个/ml,每个微滴定板可容纳20mL细胞重悬液； ④ 96孔板中间十列的各孔中加入200μL细胞悬液，每孔0.5 x 10?-10 x 10?； ⑤ 将200μL培养基加至第1列和第12列的8个孔中。第1列作空白对照。 ⑥ 将培养板放至塑料饭盒中，于37℃湿润环境中温育1-3天，等细胞进入指数生长期时可加入药物。 添加药物 ① 用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释，共制备8个浓度。 ② 对于贴壁生长的细胞，去除第2-11列各孔的培养基。 ③ 在第2列和第11列的8个孔中加入200μL新鲜配制的培养基，作为对照。 ④ 在第3-10列的细胞中加入细胞毒性药物，每个药物浓度仅需4个孔，前4孔第一种药物， 后4孔用于第二种药物。 ⑤ 向每组4 孔中各加入200μL药物溶液。 ⑥ 将培养板放回塑料盒中，温育至确定时间。 生长期 ① 在药物作用期结束时，去除培养基，加入200μL新鲜的培养基。 ② 每日换液。 存活细胞数的估算 ① 在生长期末，每孔中各加入200μL新鲜的培养基，在第1-11列所有孔中各加入50μL MTT。 ② 用铝箔包裹培养板，于37℃湿润环境中温育4h。 ③ 弃去孔中的培养基和MTT, 在第1-11列所有孔中各加入200μL DMSO, 以溶解残留的MTT。 ④ 在含有DMSO的各孔中加入Gly缓冲液(每孔25μL)。 ⑤ 立即在570nm处记录吸光值。以第1列中含培养基和MTT但不含细胞的各孔调零。 发自小木虫手机客户端 |
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