24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 649  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

刘仕博

金虫 (著名写手)

[交流] 扩增效率低是什么原因造成的呢?

各位大侠,我才开始接触real time-PCR这个让人头痛的实验。
之前找了几个引物,还算顺利。不过最近又新找了几个引物,在primer test的时候发现扩增效率很低,也就60%到80%,而且溶解曲线也不是很好,最后的两条几乎是贴在一起的。我不知道是什么原因会导致扩增效率这么低,引物设计的不对还是操作问题呢?
还有扩增效率和溶解曲线有关系吗?
先谢啦!
回复此楼

» 猜你喜欢

生命在于折腾~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘仕博

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by haidiguyue at 2009-11-16 11:51:
楼主的问题估计是引物设计的问题!



建议重新设计引物,并不是每一对引物都有100%的扩增效率的,


曲线的峰值反映了扩增产物最终地总量!

这实验就是需要耐心,细心!

有没有引物二聚体?同时考 ...

先谢啦!
刚才我又重新看了下引物,发现还真的就是二聚体造成的,不知道当初自己是怎么找的。。。现在正在重新找呢。
不过又发现了一个问题,有的引物没有二聚体,溶度曲线也很好,就是扩增效率低。但我找不到更好的引物了,可以就用那个吗?因为那个链实在是太短了。
生命在于折腾~
5楼2009-11-16 16:35:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

haidiguyue

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+0,VIP+0):解决问题的沙发才是好沙发 以后不要了啊 11-16 12:09
既然抢沙发有红包我就不客气了!


先沙一发!
2楼2009-11-16 11:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haidiguyue

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-16 12:09
楼主的问题估计是引物设计的问题!



建议重新设计引物,并不是每一对引物都有100%的扩增效率的,


曲线的峰值反映了扩增产物最终地总量!

这实验就是需要耐心,细心!

有没有引物二聚体?同时考虑PCR程序优化!
3楼2009-11-16 11:51:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
实时的条件需要优化吧,引物是很关键的,还有程序。
4楼2009-11-16 16:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 生物学调剂 +7 纸扇zhishan 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:21 by jyl0317
[考研] 机械还有还有名额吗?太难了 +8 笑笑袁 2026-04-10 8/400 2026-04-14 08:44 by screening
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 322求调剂,08工科 +4 今天是个小号 2026-04-08 4/200 2026-04-13 00:20 by baobaoye
[考研] 295分求调剂 +13 ?要上岸? 2026-04-10 13/650 2026-04-12 15:37 by laoshidan
[考研] 299求调剂 +8 ZVVZ13 2026-04-08 8/400 2026-04-12 00:40 by 蓝云思雨
[考研] 化工调剂求导师收留!一志愿失利,踏实肯干,有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +7 0856?调剂 2026-04-10 7/350 2026-04-11 21:33 by 蓝云思雨
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 0859,337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 287求调剂 +15 Fnhc 2026-04-07 21/1050 2026-04-10 19:09 by chemisry
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550, 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
信息提示
请填处理意见