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刘仕博

金虫 (著名写手)

[交流] 扩增效率低是什么原因造成的呢?

各位大侠,我才开始接触real time-PCR这个让人头痛的实验。
之前找了几个引物,还算顺利。不过最近又新找了几个引物,在primer test的时候发现扩增效率很低,也就60%到80%,而且溶解曲线也不是很好,最后的两条几乎是贴在一起的。我不知道是什么原因会导致扩增效率这么低,引物设计的不对还是操作问题呢?
还有扩增效率和溶解曲线有关系吗?
先谢啦!
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生命在于折腾~
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haidiguyue

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-16 12:09
楼主的问题估计是引物设计的问题!



建议重新设计引物,并不是每一对引物都有100%的扩增效率的,


曲线的峰值反映了扩增产物最终地总量!

这实验就是需要耐心,细心!

有没有引物二聚体?同时考虑PCR程序优化!
3楼2009-11-16 11:51:16
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haidiguyue

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+0,VIP+0):解决问题的沙发才是好沙发 以后不要了啊 11-16 12:09
既然抢沙发有红包我就不客气了!


先沙一发!
2楼2009-11-16 11:45:58
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
实时的条件需要优化吧,引物是很关键的,还有程序。
4楼2009-11-16 16:00:13
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刘仕博

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by haidiguyue at 2009-11-16 11:51:
楼主的问题估计是引物设计的问题!



建议重新设计引物,并不是每一对引物都有100%的扩增效率的,


曲线的峰值反映了扩增产物最终地总量!

这实验就是需要耐心,细心!

有没有引物二聚体?同时考 ...

先谢啦!
刚才我又重新看了下引物,发现还真的就是二聚体造成的,不知道当初自己是怎么找的。。。现在正在重新找呢。
不过又发现了一个问题,有的引物没有二聚体,溶度曲线也很好,就是扩增效率低。但我找不到更好的引物了,可以就用那个吗?因为那个链实在是太短了。
生命在于折腾~
5楼2009-11-16 16:35:48
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