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linruxin金虫 (小有名气)
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[交流]
WB没出来
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我最近在做人尿FSH（约30KD）纯蛋白的WB，但还没做出来，不知是一抗还是其他问题，有做过的吗？ 提供一下相关信息？谢谢！ 上样3--800ng 每条泳道 转：PVDF膜，80V 2h 一抗：Santa 多抗（兔抗人）1：150-1：300 二抗：1：10000 ECL 曝光显影定影 结果，没有目的条带 [ Last edited by linruxin on 2009-11-16 at 09:47 ] |
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10楼2009-11-17 11:27:12
linruxin
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2楼2009-11-16 09:49:17
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1、请按照抗体说明书上规定的稀释比例稀释抗体。楼主的二抗是进口的吗？稀释比例好高啊。 2、PVDF膜转膜前要用纯甲醇浸泡，否则转不上去。并且要注意在保质期内使用，否则也一样。 3、跑胶时点预染MARKER或者转膜后用立春红染色保证转膜没有问题。 4、转膜的时候注意降温，选择PVDF膜要注意孔径，孔径错误或者转膜时间过长可能会导致小蛋白被转穿。 5、ECL显色要按照说明书上的方法来做，不同的试剂盒方法不一样。楼主是用X光片压片曝光的吗？如果是请多压一会。也可以适当延长显影时间，因为现在天气冷了，反应的速度会变慢。 |
3楼2009-11-16 10:03:06
heismeng
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4楼2009-11-16 10:10:14