应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB没出来
141/2返回列表12下一页
查看: 957  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

linruxin

金虫 (小有名气)

[交流] WB没出来

我最近在做人尿FSH（约30KD）纯蛋白的WB，但还没做出来，不知是一抗还是其他问题，有做过的吗？

提供一下相关信息？谢谢！

上样3--800ng 每条泳道
转：PVDF膜，80V 2h
一抗：Santa 多抗（兔抗人）1：150-1：300
二抗：1：10000
ECL 曝光显影定影

结果，没有目的条带

[ Last edited by linruxin on 2009-11-16 at 09:47 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-13 10:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linruxin

金虫 (小有名气)
有人能给个建议？谢谢！
赞一下 回复此楼
2楼2009-11-16 09:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0): 11-16 11:37
1、请按照抗体说明书上规定的稀释比例稀释抗体。楼主的二抗是进口的吗？稀释比例好高啊。

2、PVDF膜转膜前要用纯甲醇浸泡，否则转不上去。并且要注意在保质期内使用，否则也一样。

3、跑胶时点预染MARKER或者转膜后用立春红染色保证转膜没有问题。

4、转膜的时候注意降温，选择PVDF膜要注意孔径，孔径错误或者转膜时间过长可能会导致小蛋白被转穿。

5、ECL显色要按照说明书上的方法来做，不同的试剂盒方法不一样。楼主是用X光片压片曝光的吗？如果是请多压一会。也可以适当延长显影时间，因为现在天气冷了，反应的速度会变慢。
赞一下(21人) 回复此楼
3楼2009-11-16 10:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
350784478(金币+2,VIP+0): 11-17 11:08
同意楼上的 首先用prestained marker确保转膜成功
同时可以加个positive control确认你的抗体是否合适有效
如果有positive的band的话 膜什么都没问题的话 就说明你上的样品不是你的目的
赞一下(11人) 回复此楼
4楼2009-11-16 10:10:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linruxin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2009-11-16 10:03:
1、请按照抗体说明书上规定的稀释比例稀释抗体。楼主的二抗是进口的吗？稀释比例好高啊。

2、PVDF膜转膜前要用纯甲醇浸泡，否则转不上去。并且要注意在保质期内使用，否则也一样。

3、跑胶时点预染MARKER或 ...

二抗是进口的，稀释度不高的了，在另一个蛋白上用了

其余操作跟你说的一样的

不过没有预染MARKER,普通marker ,但曝光后可见marher条带
赞一下 回复此楼
5楼2009-11-16 11:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mourning

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
原因太多，找个高手带你走一次吧
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-11-16 13:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqsvery

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你是自己摸索还是有师兄带？建议让师兄看着你做一遍，看操作上有么有问题！
赞一下(1人) 回复此楼
谎言和真实在河边洗澡，谎言先洗好，穿走了真实的衣服，真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言，却很难接受赤裸裸的真实。
7楼2009-11-16 13:40:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mourning

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
转膜是什么仪器，电压似乎太高，时间太长
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-11-16 14:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linruxin

金虫 (小有名气)
都是自己做的了，另一个蛋白同样做的，挺好，怀疑是一抗不结合
赞一下 回复此楼
9楼2009-11-17 10:56:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

violet77277

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用恒定电流要好一点，本人认为
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-11-17 11:27:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linruxin 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工学硕294分，求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[考博] 求博导｜生物质基多孔碳/超级电容方向，已有相关成果，寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 297，工科调剂? +4 河南农业大学-能 2026-04-14 4/200 2026-04-16 22:52 by wulijun2012
[考研] 307中医考研调剂 +6 于以采蘩 2026-04-14 6/300 2026-04-16 16:20 by qingfeng258
[考研] 297，工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考研] 求调剂 +11 小聂爱学习 2026-04-11 15/750 2026-04-15 21:57 by noqvsozv
[考研] 食品与营养（0955）271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 302求调剂 +10 易！? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分， +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭