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jjmm2009

[交流] 做定量PCR为什么要提RNA而不是DNA

有个很菜鸟的问题,定量也做了很久了,突然想到一个问题,为什么做定量PCR的时候要提取样本的RNA而不是DNA呢,请各位高手不吝赐教,非常感谢

还有一个,设计荧光定量PCR引物的时候我们都是跨内含子的,主要是怕DNA污染,那如果我的RNA提取之后用DNase I 处理过了,引物设计还一定要跨内含子吗?
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Entrez1110

定量PCR一般对某基因的mRNA表达水平定量,因为mRNA是合成蛋白的模板,蛋白质是机体生命活动执行者。基因组没有定量的意义(目前想不出有啥意义)。

跨内含子确实是防止DNA污染,虽说DNaseI可以去除DNA,但也不是100%的,加多一道防锁总没错,况且DNaseI去除DNA过程也存在人为因素,会损耗一些RNA。
3楼2009-11-12 20:59:44
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般作定量PCR的目的是看不同时间空间某个基因“活动”,一般而言就是在一个内参下看某种mRNA的丰度,所以。。。。

也可以用DNA,一般来做基因拷贝数的估算
2楼2009-11-12 20:53:31
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Entrez1110


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
基因拷贝数用这种方法去判断?请高手赐教!
4楼2009-11-12 21:02:05
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jjmm2009

引用回帖:
Originally posted by Entrez1110 at 2009-11-12 21:02:
基因拷贝数用这种方法去判断?请高手赐教!

是啊,这个我也没听过,请解释下,谢谢
5楼2009-11-12 21:14:01
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