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jjmm2009

应助: (幼儿园)
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虫号: 767773

[交流] 做定量PCR为什么要提RNA而不是DNA

有个很菜鸟的问题，定量也做了很久了，突然想到一个问题，为什么做定量PCR的时候要提取样本的RNA而不是DNA呢，请各位高手不吝赐教，非常感谢

还有一个，设计荧光定量PCR引物的时候我们都是跨内含子的，主要是怕DNA污染，那如果我的RNA提取之后用DNase I 处理过了，引物设计还一定要跨内含子吗？

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1楼 2009-11-12 20:11:09

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Entrez1110

应助: (幼儿园)
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虫号: 875407

定量PCR一般对某基因的mRNA表达水平定量，因为mRNA是合成蛋白的模板，蛋白质是机体生命活动执行者。基因组没有定量的意义（目前想不出有啥意义）。

跨内含子确实是防止DNA污染，虽说DNaseI可以去除DNA，但也不是100%的，加多一道防锁总没错，况且DNaseI去除DNA过程也存在人为因素，会损耗一些RNA。