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手工搭了个简易寡核苷酸合成装置,求拍砖
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最近实验室需要合成一些特殊修饰的探针,但现成的寡核苷酸合成服务周期太长,价格也贵。一咬牙,参考文献自己搭了个简易合成装置。 核心用了台老旧的DNA合成仪改裝,反应柱、试剂瓶、阀门都是东拼西凑的。最难的是试剂的脱水处理,乙腈反复活化分子筛,三氯乙酸溶液要现配现用。第一次合成时DMT基团脱除不完全,后来发现是酸浓度梯度没控制好。 目前合成长度还停留在15-20个碱基,粗产物用乙醇沉淀回收,HPLC分析纯度大概70%左右。虽然跟商品化寡核苷酸合成服务没法比,但做一些基础修饰探针勉强够用。 最头疼的是亚磷酰胺试剂的保存。分装后充氩气冷冻,但总感觉活性在慢慢下降。虫友们有没有小包装试剂的保存经验? 说实话自己搞寡核苷酸合成纯粹是被逼出来的,过程中各种小问题不断。如果有类似经验的虫友,欢迎交流合成中的坑和技巧。特别是长链合成和纯化方面,有没有什么土办法能提高效率? (注:特殊修饰或重要实验建议还是找专业公司合成,自建装置风险较高) |
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