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icokepf

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HPLC拖尾

本人最近在做主要含生物碱的某种中药的指纹图谱,但新柱子拿回来把梯度条件定好后就开始出现拖尾,而且柱压也在慢慢上升。(流动相是30mmol/L碳酸氢铵,0.7%氨水,0.1%三乙胺和乙腈)
   请问怎样解决拖尾现象?奉上10个金币
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清凉之水

木虫 (小有名气)

★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教! 11-13 00:40
ynmyx(金币+10,VIP+0):代楼主奖励!! 11-14 18:31
louyiceng(金币-9):奖励过高,):把金币扣到金币库 1-27 10:10
你的流动相pH值呈碱性,调到酸性5.0以下就会好很多。为什么用碳酸氢铵呢,一般大家会选择磷酸二氢铵或者乙酸铵,再用相应的酸调节pH
2楼2009-11-12 17:36:49
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icokepf

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 清凉之水 at 2009-11-12 17:36:
你的流动相pH值呈碱性,调到酸性5.0以下就会好很多。为什么用碳酸氢铵呢,一般大家会选择磷酸二氢铵或者乙酸铵,再用相应的酸调节pH

我开始的时候并不拖尾  我想知道为什么现在会?而且这个条件是人家给的,人家都能行
3楼2009-11-12 18:28:14
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刘蓓蓓

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供! 11-12 22:23
ynmyx(金币+10,VIP+0):代楼主奖励!! 11-14 18:30
lcyhappy(金币+1,VIP+0):谢谢回贴 11-16 15:45
louyiceng(金币-9):奖励过高,):把金币扣到金币库 1-27 10:10
1、筛板阻塞

1.a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷

2.填充色谱柱

3、干扰峰

3.a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误

4.调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱
4楼2009-11-12 21:23:49
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生2009

铁虫 (小有名气)

★ ★
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢提供! 11-13 00:40
ynmyx(金币+10,VIP+0):代楼主奖励!! 11-14 18:30
louyiceng(金币-9):奖励过高,):把金币扣到金币库 1-27 10:10
对于拖尾一般解决:
1:你的新主子,是不是要有个适应时间段
2:调节你的流速,特别是做指纹图谱,流速对图谱影响很大,
3:试一下柱温。20,25,30,35都是一下,对于指纹图谱柱温影响亦不可忽视,
是不是你的梯度特陡了?建议你在梯度抖处之前最好还是缓冲一下
4:做指纹图谱,柱压有变化很正常,但是要求是均匀变化。
5:如果你的取样量是1g的话,建议你取样0.5g试一下、、、
5楼2009-11-12 22:38:47
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ddw888

金虫 (小有名气)


ynmyx(金币+10,VIP+0):代楼主奖励!! 11-14 18:32
louyiceng(金币-9):奖励过高,):把金币扣到金币库 1-27 10:12
若你是普通的不耐碱色谱柱,碱性流动相造成你的键合相色谱柱不断降解
6楼2009-11-13 09:38:50
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icokepf

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ddw888 at 2009-11-13 09:38:
若你是普通的不耐碱色谱柱,碱性流动相造成你的键合相色谱柱不断降解

我的是PH 1-12的  流动相得PH10的样子
7楼2009-11-13 10:56:57
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icokepf

金虫 (小有名气)

昨晚把柱子反冲了一下,现在柱压上升了很多,拖尾没那么严重了,但还是存在
老板也说了生物碱是很容易拖尾的,不太好整
8楼2009-11-13 10:58:54
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tclchina

铁虫 (初入文坛)


ynmyx(金币+10,VIP+0):代楼主奖励!! 11-14 18:33
louyiceng(金币-9):奖励过高,):把金币扣到金币库 1-27 10:11
应该是你柱子的问题,试一下换一个品牌的柱子。估计你现在用的柱子已经受损了
9楼2009-11-13 11:29:00
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ddw888

金虫 (小有名气)


472514568(金币+1,VIP+0):给个红包奖励! 11-14 15:14
样品在流动相中溶解度不好,或太脏导致柱压过高,色谱柱不到万不得已,尽量不要反冲,会导致柱床松动。
10楼2009-11-13 12:27:04
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