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米彤果

[交流] 【交流】生物样品分析-求助

我最近尝试在建立一个新化合物的生物样品分析方法(该化合物为中性化合物),DAD检测器,AGILENT的Eclipse C18柱(4.6×150mm,5um),该化合物302nm处有最大吸收,流动相甲醇:水=72:28,流速1ml/min,化合物在7.008min出峰,空白血浆经正己烷、环己烷、乙醚液液提取后,流动相复溶解进样分析,发现在7.016min处有内源性杂质峰出现,也就是说血浆中杂质与我的目标化合物在这个流动相条件分不开,但现在不知道怎么优化条件,请大侠们帮忙指点,不胜感激!
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bbb555151617

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
472514568(金币+1,VIP+0):给个红包奖励! 11-11 11:34
楼主确定 干扰物是血浆中的吗  萃取溶剂同样也要考察 杂质峰也可能是溶剂中的
如果确定是血浆自身的干扰  
可以试着换个检测波长 毕竟是DAD的检测器  
换个250 mm的柱子  这样可以增加分离度
萃取剂同样应该严格考察   
调一下pH值  虽然化合物本身为中性 但内源性物质大多可能为酸性  
换一下有机改性剂
2楼2009-11-11 11:04:20
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ronaldoli198311

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从PH值和提取条件两个方面分别考察条件
3楼2009-11-11 21:05:24
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米彤果

谢谢bbb555151617和 ronaldoli198311 的热心解答,我可以确定干扰物是血浆中的,因为同时考察过正己烷、环己烷、乙醚、二氯甲烷空白溶剂,溶剂中是没有干扰的。试过甲醇和乙腈直接沉淀蛋白的方法,最低定量限只能到100ng/ml。所以还是希望用液液提取的样品处理方法。
这两天也在试着调节流动相的PH值,我现在只调了pH5.0和4.0的乙酸胺/乙酸缓冲液,发现我的目标化合物及干扰峰对pH值均不敏感,所以还是了换检测波长,我的目标化合物损失了30%的吸收强度,但基本上可以把干扰排除掉了,这样下来,最低定量限只能到40ng/ml。
各位觉得我还有必要试流动相调碱性么?
4楼2009-11-13 18:47:16
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