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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】SEC-HPLC遇到的怪事
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xlf_407

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】SEC-HPLC遇到的怪事

各位XDJM，遇上一难题，上来求助。

用SEC-HPLC对一PEG化蛋白进行分析，柱子是TSK G3000PWxl 加保护住，流动相为20 mM PB（pH7.3），0.8ml/min；蛋白在大约7.100min出峰，之前一年多对该样品进行检测，都正常，且在两周前我还用同样的色谱条件和柱子对样品进行了分析，一切均正常。

但昨天对样品再次进行检测时，却发现进样后，出来的峰很小（峰高~4 mAU，以前都是80 mAU），连续进样三次后，峰逐渐增大，但是也都在~30mAU以下。当时我怕未洗出的蛋白把柱子赌了，于是用水冲洗柱子，打算换0.5M NaSO4 (pH3.7）洗下柱子。换成水后（0.5ml/min），大约在40min的时候洗出了好大一个峰（应该说是个大土包），我怀疑是之前没洗脱出来的蛋白。

但是现在为什么盐洗不下蛋白，反而水可以呢？而以前可以呢。另外，我对该样品进行了浓度测定和SDS-PAGE分析，均未发现异常现象。

急盼回复！！！感激不尽！！！
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1楼 2009-11-10 21:22:03
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huiliangoo
2楼2009-11-10 21:23:28
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温炎

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
happy169(金币+1,VIP+0):^_^ 11-11 09:22
先洗洗柱子，我看你说的情况，建意你洗洗柱子，不行的话换根柱子，还不行的话，看看你的参数是不是有变化。我分析是这两方面的原因，另做一下标样看看情况，不影响精度和结果，就可以少处理一下，。
赞一下(8人) 回复此楼
人要活着才有希望！！
3楼2009-11-10 21:49:18
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