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【求助】SEC-HPLC遇到的怪事
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各位XDJM,遇上一难题,上来求助。 用SEC-HPLC对一PEG化蛋白进行分析,柱子是TSK G3000PWxl 加保护住,流动相为20 mM PB(pH7.3),0.8ml/min;蛋白在大约7.100min出峰,之前一年多对该样品进行检测,都正常,且在两周前我还用同样的色谱条件和柱子对样品进行了分析,一切均正常。 但昨天对样品再次进行检测时,却发现进样后,出来的峰很小(峰高~4 mAU,以前都是80 mAU),连续进样三次后,峰逐渐增大,但是也都在~30mAU以下。当时我怕未洗出的蛋白把柱子赌了,于是用水冲洗柱子,打算换0.5M NaSO4 (pH3.7)洗下柱子。换成水后(0.5ml/min),大约在40min的时候洗出了好大一个峰(应该说是个大土包),我怀疑是之前没洗脱出来的蛋白。 但是现在为什么盐洗不下蛋白,反而水可以呢?而以前可以呢。另外,我对该样品进行了浓度测定和SDS-PAGE分析,均未发现异常现象。 急盼回复!!!感激不尽!!! |
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3楼2009-11-10 21:49:18













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