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【求助】SEC-HPLC遇到的怪事
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各位XDJM，遇上一难题，上来求助。 用SEC-HPLC对一PEG化蛋白进行分析，柱子是TSK G3000PWxl 加保护住，流动相为20 mM PB（pH7.3），0.8ml/min；蛋白在大约7.100min出峰，之前一年多对该样品进行检测，都正常，且在两周前我还用同样的色谱条件和柱子对样品进行了分析，一切均正常。 但昨天对样品再次进行检测时，却发现进样后，出来的峰很小（峰高~4 mAU，以前都是80 mAU），连续进样三次后，峰逐渐增大，但是也都在~30mAU以下。当时我怕未洗出的蛋白把柱子赌了，于是用水冲洗柱子，打算换0.5M NaSO4 (pH3.7）洗下柱子。换成水后（0.5ml/min），大约在40min的时候洗出了好大一个峰（应该说是个大土包），我怀疑是之前没洗脱出来的蛋白。 但是现在为什么盐洗不下蛋白，反而水可以呢？而以前可以呢。另外，我对该样品进行了浓度测定和SDS-PAGE分析，均未发现异常现象。 急盼回复！！！感激不尽！！！ |
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