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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】毛细管电泳。。蛋白质标记
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plf0717

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】毛细管电泳。。蛋白质标记

各位，
用标记物对蛋白质进行标记时常用EDC和NHS，
有文献标记方法如下：1、先配标记液 标记物+EDC+NHS 2、用标记液对蛋白进行标记。
我欲用胺类物质标记蛋白

个人现有疑问：EDC作为交联剂，主要使氨基和羧基聚合，如果标记液中EDC过量的话，再用其标记蛋白质，同时应该会使蛋白质自身的氨基和羧基发生聚合反应而降低标记效率，那有什么办法可以消除这种影响呢？希望大家指导！谢谢。

顺便有啥好的标记方法请提供参考！再次感谢！

[ Last edited by plf0717 on 2009-11-10 at 17:39 ]
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1楼 2009-11-10 17:37:18
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gaoyuling

铜虫 (正式写手)
★ ★
yensh(金币+2,VIP+0):thanks, 11-11 08:31
建议在其他条件不变的情况下，只改变交联剂的量，有谱图可以选出最佳的量，这样交联剂的最佳量值就可以确定下来了！
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2楼2009-11-11 08:05:32
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plf0717

金虫 (小有名气)
先配标记液：胺+EDC+NHS,再加入标记液至含蛋白的缓冲液中反应，

但实验多次，ce中一直检测不到标记蛋白的信号！

个人觉得是没有标记上，请问大家标记蛋白需注意哪些细节问题呢？
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3楼2009-11-11 14:32:23
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gaoyuling

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
opq691(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 11-15 19:31
各个物质之间的比例您用的是多少？
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4楼2009-11-11 17:40:39
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plf0717

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gaoyuling at 2009-11-11 17:40:
各个物质之间的比例您用的是多少？

看有文献直接给1：1：1的比例。

1mg含1羧基的胺，1mg EDC，1mg NHS，
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5楼2009-11-11 20:34:43
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gaoyuling

铜虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
happy169(金币+1,VIP+0):^_^欢迎常来分析版 11-13 14:43
自己认为是没有标记上是么？你可以加大一下交联剂的量在试试看效果怎么样！
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6楼2009-11-13 13:00:32
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plf0717

金虫 (小有名气)
★
opq691(金币+1,VIP+0):交流奖励 11-15 19:31
引用回帖:
Originally posted by gaoyuling at 2009-11-13 13:00:
自己认为是没有标记上是么？你可以加大一下交联剂的量在试试看效果怎么样！

加大交联剂的用量还是没效果。

另外，交联剂过量的话标记液加入到蛋白里面会使蛋白质缩合的。
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7楼2009-11-15 19:13:06
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