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小虫子3198

铜虫 (小有名气)

[交流] western出怪了

最近做western转膜的时候
总是转不上去
而且转后的膜上,胶上和垫纸板上都没有任何东西
奇怪东西哪儿去了
我用的PVDF膜,15V/50min
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lzhwin

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我碰到过楼主这样的问题,也是用PVDF膜预染MARKER转完膜之后既没在膜上也没在胶上就那么没了,我后来总结的原因是PVDF膜过期了,因为相同的条件NC膜转的很好。
另外可能的原因:PVDF膜必须用纯甲醇浸泡一下(至少要用纯甲醇润湿),而且避免在试验结束前再次变干。

把转膜后的胶考染一下,看看蛋白是不是还在胶上。
PVDF膜转穿的可能性不大,只要你的蛋白不是太小(20KD以下)。
注意转膜时的放热问题,最好4度冰箱或者用冰。
7楼2009-11-10 22:23:36
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你应该给出详细资料 比如蛋白多大
用的什么Marker。  或者你是从什么结果得出你转魔失败?
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
2楼2009-11-10 16:33:35
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

引用回帖:
Originally posted by 小虫子3198 at 2009-11-10 16:28:
最近做western转膜的时候
总是转不上去
而且转后的膜上,胶上和垫纸板上都没有任何东西
奇怪东西哪儿去了
我用的PVDF膜,15V/50min

转膜不能完全照搬别人的转膜条件的,不同的仪器,不同的蛋白都不一样,建议你根据自己的样品一系列对照摸一摸条件。
可以用QQ找我……
3楼2009-11-10 16:39:03
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mourning

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
buffer有没用错?干转半干还是湿转?电及有没反?
4楼2009-11-10 16:54:00
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