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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western出怪了
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小虫子3198

铜虫 (小有名气)

[交流] western出怪了

最近做western转膜的时候
总是转不上去
而且转后的膜上，胶上和垫纸板上都没有任何东西
奇怪东西哪儿去了
我用的PVDF膜，15V/50min
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1楼 2009-11-10 16:28:56
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你应该给出详细资料 比如蛋白多大
用的什么Marker。  或者你是从什么结果得出你转魔失败？
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
2楼2009-11-10 16:33:35
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
引用回帖:
Originally posted by 小虫子3198 at 2009-11-10 16:28:
最近做western转膜的时候
总是转不上去
而且转后的膜上，胶上和垫纸板上都没有任何东西
奇怪东西哪儿去了
我用的PVDF膜，15V/50min

转膜不能完全照搬别人的转膜条件的，不同的仪器，不同的蛋白都不一样，建议你根据自己的样品一系列对照摸一摸条件。
赞一下 回复此楼
可以用QQ找我……
3楼2009-11-10 16:39:03
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mourning

木虫 (正式写手)
★
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buffer有没用错？干转半干还是湿转？电及有没反？
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4楼2009-11-10 16:54:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
没活化膜？
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5楼2009-11-10 19:10:40
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小虫子3198

铜虫 (小有名气)
关键这是我们实验室成熟的条件，过去都好好的
郁闷之极啊
接着努力
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6楼2009-11-10 21:21:32
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★
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我碰到过楼主这样的问题，也是用PVDF膜预染MARKER转完膜之后既没在膜上也没在胶上就那么没了，我后来总结的原因是PVDF膜过期了，因为相同的条件NC膜转的很好。
另外可能的原因：PVDF膜必须用纯甲醇浸泡一下（至少要用纯甲醇润湿），而且避免在试验结束前再次变干。

把转膜后的胶考染一下，看看蛋白是不是还在胶上。
PVDF膜转穿的可能性不大，只要你的蛋白不是太小（20KD以下）。
注意转膜时的放热问题，最好4度冰箱或者用冰。
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7楼2009-11-10 22:23:36
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胡中一

铁虫 (初入文坛)
★
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我们实验室都是用的NC膜，电转的用的恒流，小分子的一般180A一个小时
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8楼2009-11-10 23:26:51
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mcl49510

铜虫 (小有名气)
不是蛋白被水解了吧？
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9楼2009-11-11 01:44:13
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davidck

金虫 (正式写手)
★
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用prestain的蛋白maker，到时候转完了就能知道蛋白是不是转到膜上了
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10楼2009-11-11 02:02:20
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