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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助:关于PBI121!
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)

[交流] 求助:关于PBI121!

我把pBI121进行Sac I和BamH III进行双酶切和我的目的片段(约500bp),连接后热机转化,长出的菌落进行菌落PCR(把菌落容于双蒸水)得到阳性菌落,将阳性菌落进行扩大培养,但是摇了16个小时,LB培养基依然清亮!
  最近重复做,竟然连平板上都不长菌落了(20h内)! 我的Kan浓度是25ug/ml.

  请各位XDJM帮我分析下啊! 感谢!!!
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
1楼 2009-11-10 08:13:20
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
pBI121应该没有问题,大小是对的,而且我用BamHI SacI切小的的大小和Gus是一致的.
我觉得应该是连接 这个环节的问题. 因为刚到另外一个实验市 接手的东西以及用的试剂都不太熟悉.
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
3楼2009-11-10 09:00:23
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士
东西全扔了，重新做。
PBI跑一下胶看看大小对不对。
这个质粒我用过，转基因用的。是有点大。
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未来天空才是极限
2楼2009-11-10 08:58:44
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