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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR的操作问题！
汕头大学海洋科学接受调剂
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churmi

银虫 (正式写手)

[交流] PCR的操作问题！

想问问大侠：
      PCR的操作过程中一下步骤是必须得吗？
   1. 在超净台内完成？
   2. 从-20度取出的水，buffer，dNTP都必须放在冰上溶解；并持续到整个加样结束？

   谢了！
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1楼 2009-11-09 21:22:35
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-10 09:28
churmi(金币+1,VIP+0): 11-11 08:45
churmi(金币+1,VIP+0): 11-11 08:45
看你做什么东西的嘛  常规的不用在无菌条件下做啊  我有时候枪头都不灭菌
酶有必要在低温下保存 至于操作完全没有必要在低温下操作
赞一下(21人) 回复此楼
可以用QQ找我……
2楼2009-11-09 21:31:15
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
★
churmi(金币+1,VIP+0): 11-11 08:45
不需要，dntp要从冰箱中取出其他可常温操作！
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3楼2009-11-09 21:32:10
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小小豆豆

金虫 (小有名气)
不用，温度只要不是太高，就不用在冰上操作。
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4楼2009-11-09 21:49:30
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)
在超净台上是必须的，因为要保证无杂dna混入，但第二种步骤就不必了,可常温操作的
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5楼2009-11-09 22:31:30
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by churmi at 2009-11-9 21:22:
想问问大侠：
      PCR的操作过程中一下步骤是必须得吗？
   1. 在超净台内完成？
   2. 从-20度取出的水，buffer，dNTP都必须放在冰上溶解；并持续到整个加样结束？

   谢了！

都不需要，但是酶必须要放在冰盒上。
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6楼2009-11-09 22:36:08
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 11-10 09:28
to 1:
如果是要做阳性鉴定,建议超净台.
如果是单单做亚克隆,可以在实验台操作.
因为操作时间如果比较长超静台的风会 让你的PCR体系中的水分挥发,导致体系缩小影响实验.
to: 2
dNTP一定在要冰上溶解. 水肯定不用,不是混合物. buffer如果不是很着急的话,最好也在冰上操作. 毕竟实验仔细后,即使出了问题也好分析.
赞一下(20人) 回复此楼
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
7楼2009-11-10 08:38:07
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bioxixi

木虫 (著名写手)
除非是怕污染的材料，不需要在超净台完成

水也不需要-20了，
酶必须放冰上而且离开冰箱的时间越短越好
其他的尽量在冰上呗
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8楼2009-11-10 09:14:21
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quiller2000

木虫 (著名写手)
你用eastTaq之类的预混的吧，都不用，加入模板和引物即可
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致良知
9楼2009-11-10 09:35:18
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cato8163

银虫 (正式写手)
小可，每次操作尽量在超净台上。小可，认为，这样比较保险。虽然，在实验室（冰上操作）也能P出来，但心里总是怕出问题。
万一出问题，就说不清了。
小可，建议：尽是在超净台上、冰上操作，在冰上溶解。
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10楼2009-11-10 09:49:20
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