| 查看: 4953 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 naonao_1357 的 3 个金币 | |||
[交流]
【求助】IPTG诱导大肠杆菌表达的用量，温度，转速等条件是怎样的？
|
|||
| 本人是新手，刚开始实验没多久，最近要做IPTG诱导大肠杆菌表达的实验，载体是PET28a，宿主是BL21。不知道要如何配置IPTG试剂？诱导时用量是多少？培养温度、转速多少合适？有什么需要注意的地方？请高手指教，多谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
272分材料子求调剂
已经有47人回复
-
085404 293求调剂
已经有9人回复
-
一志愿新疆大学085401，314分
已经有4人回复
-
材料与化工300求调剂
已经有43人回复
-
290求调剂
已经有6人回复
-
求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分，
已经有9人回复
-
山东高校教师考核超级无底线，员工过不下去啦
已经有9人回复
-
085410 273求调剂
已经有9人回复
-
297求调剂
已经有16人回复
-
291求调剂
已经有11人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
quiller2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 160 (高中生)
- 贵宾: 0.114
- 金币: 2752.9
- 散金: 50
- 红花: 26
- 帖子: 1168
- 在线: 167.3小时
- 虫号: 895537
- 注册: 2009-11-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
★
naonao_1357(金币+1,VIP+0):谢谢 11-10 12:12
naonao_1357(金币+1,VIP+0):谢谢 11-10 12:12
|
建议你先分析一下你的蛋白质的性质，比如是否含有大肠杆菌的稀有密码子，大小，疏水性（膜蛋白），是否对细胞具有毒性 如果这些都没有问题的话，那么就容易了，基本大肠杆菌的生长条件；新鲜菌株接种后在OD600=0.3左右加入IPTG到终浓度为1mM,37°，180-200rpm三小时后收集即可 建议在加IPTG前和蛋白收集前取1mL菌液，离心收集细胞，裂解后走SDS-PAGE看看是否有你的蛋白被诱导出来.(严格的说你需要同时诱导空载体的菌株) 如果你不放心，可以在培养基中加点儿葡萄糖防止渗漏表达！ |
2楼2009-11-09 21:03:34
3楼2009-11-09 21:23:06
4楼2010-03-25 15:55:24
