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[交流]
【求助】IPTG诱导大肠杆菌表达的用量，温度，转速等条件是怎样的？
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| 本人是新手，刚开始实验没多久，最近要做IPTG诱导大肠杆菌表达的实验，载体是PET28a，宿主是BL21。不知道要如何配置IPTG试剂？诱导时用量是多少？培养温度、转速多少合适？有什么需要注意的地方？请高手指教，多谢！ |
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quiller2000
木虫 (著名写手)
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naonao_1357(金币+1,VIP+0):谢谢 11-10 12:12
naonao_1357(金币+1,VIP+0):谢谢 11-10 12:12
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建议你先分析一下你的蛋白质的性质，比如是否含有大肠杆菌的稀有密码子，大小，疏水性（膜蛋白），是否对细胞具有毒性 如果这些都没有问题的话，那么就容易了，基本大肠杆菌的生长条件；新鲜菌株接种后在OD600=0.3左右加入IPTG到终浓度为1mM,37°，180-200rpm三小时后收集即可 建议在加IPTG前和蛋白收集前取1mL菌液，离心收集细胞，裂解后走SDS-PAGE看看是否有你的蛋白被诱导出来.(严格的说你需要同时诱导空载体的菌株) 如果你不放心，可以在培养基中加点儿葡萄糖防止渗漏表达！ |
2楼2009-11-09 21:03:34
3楼2009-11-09 21:23:06
4楼2010-03-25 15:55:24