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naonao_1357

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】IPTG诱导大肠杆菌表达的用量,温度,转速等条件是怎样的?

本人是新手,刚开始实验没多久,最近要做IPTG诱导大肠杆菌表达的实验,载体是PET28a,宿主是BL21。不知道要如何配置IPTG试剂?诱导时用量是多少?培养温度、转速多少合适?有什么需要注意的地方?请高手指教,多谢!
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

蛋白的合成速度怎么看呢?

引用回帖:
Originally posted by anmt at 2009-11-09 21:23:06:
IPTG一般配制成100mM的储存液,我们做表达用BL21做宿主菌,加三个IPTG的浓度,分别是0.1mM,0.5mM,1mM,然后看哪个浓度最合适就采用哪个浓度。37度,200rpm 4h或者30度过夜诱导,具体看你的蛋白的合成速度及你想要 ...

30°诱导是不是得时间长些好呢?我以前是4个小时。但是现在蛋白表达不出来,很郁闷------
4楼2010-03-25 15:55:24
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