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36678293铜虫 (正式写手)
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基因克隆到pCAMIBA1300
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请教各位： 我的一个基因（1.5kbp）想克隆到pCAMBIA（12kbp，kan）上，但是做了好多次链接，就是连不上去，PCR双酶切链接试过了，基因从T载体上切下在链接也试过了，但是就是不长斑，感受态的效率也没问题，XL-GOLD的，10的8次方的效率应该有；链接酶试过SOLITION 1，和T4, 链接体系10ul和20ul都试过了，载体与片段的比例1：1--1：10都做过了。 可是就不是不知道什么原因，在这里请教大家了。。。。 不懂的不要留言，谢谢！！！ [ Last edited by 36678293 on 2009-11-9 at 19:34 ] |
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zjwang
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2楼2009-11-09 20:08:45
scelab
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lz很辛苦哈~ 帮你顶个帖 偶根据自己和别人的经验，废话几句  12k+1.5k的不算小啊，或许你那些不同的搭配里面有最佳的组合，也许并不是那些未知的原因导致链接失败，有可能是确实本身效率很低~~~ 偶的导当年连6k+12k的，连了俩月，最终还是成功了~最终也没发现新的原因~重复而已~~~ 废话几句，别介意  ps一句，适当降低kan的浓度，或许会好点 [ Last edited by scelab on 2009-11-9 at 21:31 ] |
3楼2009-11-09 21:27:51
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5楼2009-11-10 00:08:46
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