应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因克隆到pCAMIBA1300
192/2返回列表上一页12
查看: 989  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

36678293

铜虫 (正式写手)
同样的平板，正对照加10ul感受态长一满平板，单菌落都看不到。。。

载体双酶切，可以切下条带！！！
赞一下 回复此楼
11楼2009-11-11 00:02:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangnanxuetong

金虫 (小有名气)
首先 看看载体酶切是否有问题！
然后在连接过程中，尝试几种不同比例连接 试试！
赞一下 回复此楼
12楼2009-11-11 10:19:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

36678293

铜虫 (正式写手)
13楼2009-11-13 08:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xnn
。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
14楼2009-11-13 12:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jojojet

新虫 (初入文坛)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-30 12:42
问题一样，我的载体是pcam1301 目的条带1.7kb

大家努力。
往多交流 邮件 guizhouliuwei@163.com
赞一下(20人) 回复此楼
15楼2009-11-13 22:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jojojet

新虫 (初入文坛)
我连上了，但是是反向连接。楼主的怎么样了？
赞一下 回复此楼
16楼2009-11-29 23:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5,VIP+0): 11-30 12:44
首先想问楼主一个问题，1300是双元载体用于植物转基因。但是上面并没有启动子和终止子楼主的连接的片段上已经有启动子和终止子了吗？就我所知的很多有启动子的中间载体（PRT104  PUCCRNAi）都是通过一步单酶切连入1300的，楼主用的是什么中间载体呢？另外1300是可以通过蓝白斑筛选的。

1300上的酶切位点应该都是可以通过一步双酶切切开的，建议还是多检查酶切的相关试剂有没有污染，感受态细胞的情况好不好。1300载体比较大，转化率是会低一些，不行就重新做感受态吧。我们实验室还出过一次很恶心的问题：抗生素坏了。不行就借别人的kan试一下吧
赞一下(20人) 回复此楼
17楼2009-11-30 12:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)
这么快就评价了？还没说完呢。楼主转化的时候涂了多少感受态细胞？像这样的大载体转化我们一般是离心下来然后全部涂板或者至少要涂一半。
再次提醒：别忘了蓝白斑筛选。

最后问一句楼主用的真的是1300？上面没有启动子你只连一个基因上去怎么做表达啊？担心中。。。

PS:楼上的帖子有个小错误，PUCCRNAi上没有启动子

[ Last edited by lzhwin on 2009-11-30 at 17:23 ]
赞一下 回复此楼
18楼2009-11-30 13:03:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
1. 确保酶切没有问题，
2. 不行就电转试试
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
19楼2009-11-30 17:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 36678293 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 346分，工科0854求调剂，专硕 +5 moser233 2026-04-12 6/300 2026-04-12 21:18 by moser233
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +5 李木子啊哈哈 2026-04-12 5/250 2026-04-12 20:10 by bljnqdcc
[考研] 药学求调剂 +3 RussHu 2026-04-12 4/200 2026-04-12 17:49 by 陈皮皮
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +9 小熊睿睿_s 2026-04-11 9/450 2026-04-12 14:18 by 昆工高欣
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[基金申请] 山东省基金2026 +5 jerry681 2026-04-08 6/300 2026-04-12 08:33 by kudofaye
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +12 振—TZ 2026-04-10 12/600 2026-04-12 07:54 by wj165256
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[硕博家园] 有没有学校材料专业收跨调(一志愿085410) +6 momo(上岸版) 2026-04-06 9/450 2026-04-11 22:38 by wj165256
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 计算机类求调剂，22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 材料专业344求调剂 +16 hualkop 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 17:28 by laoshidan
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
[考研] 332，085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 生物学学硕，初试351分，求调剂 +4 …～、王…～ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
[考研] 一志愿南科大生物学297分，求调剂推荐 +8 Y-yyusx 2026-04-06 9/450 2026-04-07 19:38 by biomichael
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭