24小时热门版块排行榜    

查看: 1138  |  回复: 18
当前主题已经存档。

36678293

铜虫 (正式写手)

同样的平板,正对照加10ul感受态长一满平板,单菌落都看不到。。。

载体双酶切,可以切下条带!!!
11楼2009-11-11 00:02:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangnanxuetong

金虫 (小有名气)

首先 看看载体酶切是否有问题!
然后在连接过程中,尝试几种不同比例连接 试试!
12楼2009-11-11 10:19:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

36678293

铜虫 (正式写手)

13楼2009-11-13 08:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xnn

。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
14楼2009-11-13 12:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jojojet

新虫 (初入文坛)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-30 12:42
问题一样,我的载体是pcam1301 目的条带1.7kb

大家努力。
往多交流 邮件 guizhouliuwei@163.com
15楼2009-11-13 22:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jojojet

新虫 (初入文坛)

我连上了,但是是反向连接。楼主的怎么样了?
16楼2009-11-29 23:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5,VIP+0): 11-30 12:44
首先想问楼主一个问题,1300是双元载体用于植物转基因。但是上面并没有启动子和终止子楼主的连接的片段上已经有启动子和终止子了吗?就我所知的很多有启动子的中间载体(PRT104  PUCCRNAi)都是通过一步单酶切连入1300的,楼主用的是什么中间载体呢?另外1300是可以通过蓝白斑筛选的。

1300上的酶切位点应该都是可以通过一步双酶切切开的,建议还是多检查酶切的相关试剂有没有污染,感受态细胞的情况好不好。1300载体比较大,转化率是会低一些,不行就重新做感受态吧。我们实验室还出过一次很恶心的问题:抗生素坏了。不行就借别人的kan试一下吧
17楼2009-11-30 12:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)

这么快就评价了?还没说完呢。楼主转化的时候涂了多少感受态细胞?像这样的大载体转化我们一般是离心下来然后全部涂板或者至少要涂一半。
再次提醒:别忘了蓝白斑筛选。

最后问一句楼主用的真的是1300?上面没有启动子你只连一个基因上去怎么做表达啊?担心中。。。

PS:楼上的帖子有个小错误,PUCCRNAi上没有启动子

[ Last edited by lzhwin on 2009-11-30 at 17:23 ]
18楼2009-11-30 13:03:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

1. 确保酶切没有问题,
2. 不行就电转试试
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
19楼2009-11-30 17:37:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 36678293 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +11 医学老男孩 2026-08-13 29/1450 2026-08-14 00:04 by 大快人心啦
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
请填处理意见