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求助 circrna表达量选取以及RnaseR实验
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我用生信筛选出乳腺癌中差异表达的circRNA, 用RT-qPCR检测表达量，但是每次目的CT值都在30左右，甚至更高。内参用的GAPDH在16-18左右，我用文献里的一个circRNA的引物做对照，这个circRNA找的不够好引物不特异，ct值也在30左右。我想咨询一下相关大佬，circRNA的绝对表达量都这么低的吗，还是有高的，如果表达量低还能做吗。 我做RnaseR实验，用PCR跑40个循环才有一条较浅的条带，而RnaseR阳性的一点条带都没有了，请问大家都是什么情况，是我的目的基因量太少做出来不明显还是说这个circRNA不耐受RnaseR酶，或者压根就不是环状RNA是线性RNA. 后续我又在做核质分离提取RNA实验，目前还在探索，核质提完RNA大家的CT值都在多少，如果我的还是30出头还能使用吗？ 最近做的siRNA敲低，想跳过前面的验证直接看细胞上有没有用，大家有什么好的建议吗，我做的肿瘤细胞，用的opti-mem培养基12h后细胞都死掉了，可能是密度很低，也可能是肿瘤细胞不耐受，我在这里直接转染可以吗 转染后还是要做RT-qPCR来验证敲低效率，RT-qPCR真的对我来说很头大，组里老师说我的CT太大了超过30就是假的 真的是这样吗 |
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