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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PET载体诱导蛋白表达时用的温度
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2004371310

木虫 (著名写手)

[交流] PET载体诱导蛋白表达时用的温度

本人现在想用PET-32a(+)载体诱导一个蛋白进行表达,不知道应该用什么温度来诱导呢，请各位做过此类实验的高手指教一下！另外也想问一下应使用什么浓度的IPTG来诱导。
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1楼 2009-11-07 23:00:34
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做过29a，30度诱导，IPTG1umol
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小木虫之有关部门负责人
2楼2009-11-07 23:03:52
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以做一个温度试验啊，选择不同温度来进行诱导，然后SDS-PAGE分析，IPTG终浓度可以用1mM的
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I am not a hero , but I served with heroes！
3楼2009-11-08 08:51:57
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shenqicc

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
温度不一定的，诱导大多数是低温诱导，25度、30度都可能，但也有情况是37乃至更高，最好像LS那位说的，做个温度梯度实验后用SDS或者测定酶活力来鉴定，有时还会需要变温控制；IPTG一般1mM，但是若想确定最佳浓度也需做浓度梯度实验。
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4楼2009-11-08 09:20:40
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houcaixia

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道你做的是什么基因的，我们做了一个旋转正交试验，温度在28-32度时的酶活相对较高，你可以试验一下。
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5楼2009-11-08 09:29:55
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们实验室也用PET-32a(+)载体诱导棉花纤维蛋白的表达，37°C恒温诱导
IPTG母液浓度为24mg/mL，诱导时往100mL LB培养基中加入20微升即可
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天行健，君子以自强不息地势坤，君子以厚德载物
6楼2009-11-08 09:46:08
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)
28°C
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7楼2009-11-08 09:59:16
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