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2004371310

木虫 (著名写手)

[交流] PET载体诱导蛋白表达时用的温度

本人现在想用PET-32a(+)载体诱导一个蛋白进行表达,不知道应该用什么温度来诱导呢,请各位做过此类实验的高手指教一下!另外也想问一下应使用什么浓度的IPTG来诱导。
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做过29a,30度诱导,IPTG1umol
小木虫之有关部门负责人
2楼2009-11-07 23:03:52
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以做一个温度试验啊,选择不同温度来进行诱导,然后SDS-PAGE分析,IPTG终浓度可以用1mM的
I am not a hero , but I served with heroes!
3楼2009-11-08 08:51:57
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shenqicc

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
温度不一定的,诱导大多数是低温诱导,25度、30度都可能,但也有情况是37乃至更高,最好像LS那位说的,做个温度梯度实验后用SDS或者测定酶活力来鉴定,有时还会需要变温控制;IPTG一般1mM,但是若想确定最佳浓度也需做浓度梯度实验。
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4楼2009-11-08 09:20:40
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houcaixia

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知道你做的是什么基因的,我们做了一个旋转正交试验,温度在28-32度时的酶活相对较高,你可以试验一下。
5楼2009-11-08 09:29:55
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们实验室也用PET-32a(+)载体诱导棉花纤维蛋白的表达,37°C恒温诱导
IPTG母液浓度为24mg/mL,诱导时往100mL LB培养基中加入20微升即可
天行健,君子以自强不息地势坤,君子以厚德载物
6楼2009-11-08 09:46:08
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

7楼2009-11-08 09:59:16
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