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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于真菌总DNA的提取问题
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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 关于真菌总DNA的提取问题

提黄曲霉的总DNA，没提出来，不知道试验中需要注意哪些？菌体一般要取多少，研磨时间大概多长，最后一步加TE时只加了30微升跑电泳的时候还是没条带，应该不是浓度低的问题吧
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1楼 2009-11-07 19:40:28
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yangjunzhong

金虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-8 15:15
取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉。溶于200 ulTE中
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2楼2009-11-07 20:03:46
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jjlbest

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-8 15:15
提取DNA的关键是能把菌体破碎，一但菌体碎了，DNA就一定能提出来的。
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3楼2009-11-07 20:17:18
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xiaozi2964

金虫 (正式写手)
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菌体最后提出来的话，应该能有絮状沉淀吧！我是做细菌的，真菌不是太懂。
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4楼2009-11-07 20:23:08
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王雨云

金虫 (小有名气)
我是-70°冰冻30分钟再研磨的，上次忘了加石英砂，可能研磨不充分
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5楼2009-11-08 09:13:05
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)
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amisking(金币+3,VIP+0): 11-8 15:15
菌丝选择量加大
用液氮充分研磨
定量标准：每个样至少舀六勺液氮，时间控制在20分钟一个样
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天行健，君子以自强不息地势坤，君子以厚德载物
6楼2009-11-08 09:57:26
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pamela9838

铜虫 (小有名气)
真菌还要注意破壁吧
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7楼2009-11-08 10:47:52
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chang123

★
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提取DNA的关键是能把菌体破碎，
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8楼2009-11-08 14:45:30
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kycg

铜虫 (小有名气)
★
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如何打破细胞壁是一关键环节。常用的破壁方法主要有冷冻干燥研磨法、玻璃珠机械破壁法、酶解法和氯化苄法等。
有人用带有无菌塑料钻头的手电钻来研磨提取对象以打破细胞壁，效果还挺不错的
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找片树叶把天遮住
9楼2009-11-08 15:19:44
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yexiliu

铜虫 (小有名气)
★
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我用的是CTAB法提取的，感觉还行
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一切皆有可能
10楼2009-11-08 16:11:32
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