关于真菌总DNA的提取问题 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋

11楼2009-11-09 00:33:59

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王雨云

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我用的是冷冻干燥研磨法，实验室其他人也是用的这个方法，而且提取出了DNA，可能我的菌体没有研磨充分吧

12楼2009-11-09 09:55:12

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mada1986

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没做过真菌做细菌的，一直用蛋白酶K来着...

13楼2009-11-10 14:09:00

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王雨云

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我今天跑了个PCR，结果证明我的总DNA还是提出来了，主要是浓度太低才会出现电泳检测看不到条带，呵呵

14楼2009-11-10 16:11:45

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陈思容

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我用的是酶解法破壁、CTAB除多糖、异丙醇沉淀，最后溶解都是用双蒸水50微升，研磨时加石英砂，有书上说研磨20-30min,个人感觉研磨到乳浊状差不多了

15楼2009-11-10 18:26:18

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diaoyuhua

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研磨充分就行了，不要在外时间过长，还有就是只要提出来了3~5ul跑电泳就够了

16楼2009-11-10 19:02:20

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beisimai895

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30uL还没跑出来应该不是浓度问题，我提的也是曲霉的基因组，提完后只跑5uL，菌体不易太多，要不然破壁会不充分，至于时间，这个应该以研磨程度来定，只有研磨到最后菌体都成粉未状才行，我一般磨七八分钟。

17楼2009-11-11 11:23:49

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王雨云

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不是跑电泳加量30ul，是说最后把DNA从柱子上洗下来是加了30ul的TE，跑电泳我是加的5ul,电泳检测时还是没有条带，后来做PCR时证明里面有DNA的存在，她们就说我提的DNA浓度低了。过柱时我都是3管1.5ml的上清过同一个柱子，结果还是浓度低，索性不管它，只要有DNA存在就行了