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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 关于真菌总DNA的提取问题

提黄曲霉的总DNA,没提出来,不知道试验中需要注意哪些?菌体一般要取多少,研磨时间大概多长,最后一步加TE时只加了30微升跑电泳的时候还是没条带,应该不是浓度低的问题吧
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yangjunzhong

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+1,VIP+0): 11-8 15:15
取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉。溶于200 ulTE中
2楼2009-11-07 20:03:46
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jjlbest

木虫 (著名写手)

★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-8 15:15
提取DNA的关键是能把菌体破碎,一但菌体碎了,DNA就一定能提出来的。
3楼2009-11-07 20:17:18
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xiaozi2964

金虫 (正式写手)


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菌体最后提出来的话,应该能有絮状沉淀吧!我是做细菌的,真菌不是太懂。
4楼2009-11-07 20:23:08
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王雨云

金虫 (小有名气)

我是-70°冰冻30分钟再研磨的,上次忘了加石英砂,可能研磨不充分
5楼2009-11-08 09:13:05
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yangguoliguo

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 11-8 15:15
菌丝选择量加大
用液氮充分研磨
定量标准:每个样至少舀六勺液氮,时间控制在20分钟一个样
天行健,君子以自强不息地势坤,君子以厚德载物
6楼2009-11-08 09:57:26
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pamela9838

铜虫 (小有名气)

真菌还要注意破壁吧
7楼2009-11-08 10:47:52
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chang123


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提取DNA的关键是能把菌体破碎,
8楼2009-11-08 14:45:30
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kycg

铜虫 (小有名气)


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如何打破细胞壁是一关键环节。常用的破壁方法主要有冷冻干燥研磨法、玻璃珠机械破壁法、酶解法和氯化苄法等。
有人用带有无菌塑料钻头的手电钻来研磨提取对象以打破细胞壁,效果还挺不错的
找片树叶把天遮住
9楼2009-11-08 15:19:44
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yexiliu

铜虫 (小有名气)


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我用的是CTAB法提取的,感觉还行
一切皆有可能
10楼2009-11-08 16:11:32
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