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实验室干货｜手把手教你用BCA法精准测定蛋白浓度！
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想快速掌握BCA蛋白定量技术？这份超详细实操指南别错过！ 实验全流程 1?? 96孔板预处理：先给孔板贴上清晰标签，标准品孔加入20μL PBS打底，样品孔则加入18μL PBS，为后续上样打好基础。 2?? 样品添加：取2μL已稀释10倍的蛋白样品，精准加入样品孔。控制合适浓度是获取准确结果的关键！ 3?? 标准曲线制备：在首个标准品孔注入20μL 2μg/μL标准蛋白溶液，通过梯度稀释构建浓度梯度（最后一孔不加样）。 4?? 工作液配制：按实际孔数+5个冗余量，将BCA试剂A液与B液以50:1比例混合，每孔加入200μL，确保加样量一致。 5?? 气泡处理：用针头小心戳破液面气泡，避免影响反应效果和读数准确性。 6?? 恒温孵育：将96孔板置于37℃孵箱反应30分钟，等待蛋白与BCA试剂充分反应显色。 7?? 结果检测：孵育完成后，立即使用酶标仪在562nm波长下读取各孔吸光度，数值越高代表蛋白浓度越高。 ?? DLab实验中心特别提醒 ? 试剂使用：标准品可低温保存，但BCA工作液必须现配现用 ? 数据可靠：每个样品至少设置3个复孔，异常值需剔除 ? 标准曲线：每次实验都要重新绘制，注意坐标轴对应关系 ? 操作规范：加样需精准，避免产生气泡，加样后轻晃混匀 ? 及时检测：孵育结束后尽快读数，防止吸光值发生变化 ? 浓度控制：提前预估样品浓度，确保在标准曲线范围内，记录稀释倍数 掌握这些要点，BCA蛋白定量实验轻松搞定！? #科研干货 #实验室技能 #BCA法 #蛋白浓度测定 #科研日常 #实验操作指南 发自小木虫IOS客户端 |
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