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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于处理的重复问题
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germ2010

木虫 (正式写手)

Sustainability

[交流] 关于处理的重复问题

最近很困惑，求解！
    试验设计采用的是随机区组设计，设计了3个重复，取样的时候是分开取的，提DNA也是分开提的，现在需要定量PCR，发现如果每个DNA只做一管误差太大，每个DNA都做3次重复，成本太高了，时间也多很多！现在想请教高手，能不能把重复间的DNA混合，然后用混匀后的DNA做3个重复？
     小弟做的是土壤微生物，在纯培养的过程中也有同样的困惑，烦恼中，请大家帮忙！
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路虽遥行则必至！事虽难做则有成！努力奋斗！
1楼 2009-11-06 14:57:21
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★ ★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-6 17:43
germ2010(金币+3,VIP+0):多谢 11-15 21:34
我认为不能，如果混合了做三次RT-PCR得到的结果对比只能说明你仪器的好坏，或者你加样的水平。 你设置重复本来就是为了观测你样品的中某DNA含量是否平均，现在混合了，还怎么说明问题呢？
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可以用QQ找我……
2楼2009-11-06 16:26:22
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germ2010

木虫 (正式写手)

Sustainability
引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-11-6 16:26:
我认为不能，如果混合了做三次RT-PCR得到的结果对比只能说明你仪器的好坏，或者你加样的水平。 你设置重复本来就是为了观测你样品的中某DNA含量是否平均，现在混合了，还怎么说明问题呢？

非常感谢您的指教，实际上要证明仪器的好坏和加样的水平不用混合也完全可以证明，关键是重复间的差异太大了，重复间的差异有时候比处理间还大多了，我的目的是比较不同处理间基因拷贝数的差异。
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3楼2009-11-06 17:09:36
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nsa0804

木虫 (正式写手)
★ ★
germ2010(金币+2,VIP+0):谢谢 11-15 21:34
不行的~~~ 这样你的区组间重复就没有意义了
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努力使自己改变这世上唯一不变的就是变
4楼2009-11-06 17:13:08
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cato8163

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-6 17:43
germ2010(金币+3,VIP+0):非常感谢您的指教，谢谢 11-15 21:35
小可，最近也想做PR-PCR，针对你的情况，小可认为不可取。有些时候，确实处理间差异比重复间还大。在重复时，设计最少3个。最好是4个了，如果有1个偏差太大，是可以舍去的。虽然成本高了，但实验结果是可信的。
和老板说说，多做几个重复吧。 祝好运。
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5楼2009-11-06 17:14:47
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germ2010

木虫 (正式写手)

Sustainability
引用回帖:
Originally posted by nsa0804 at 2009-11-6 17:13:
不行的~~~ 这样你的区组间重复就没有意义了

谢谢您的指教，有时候看外文文献也有人混合的，并且影响因子还比较高，
但是我讲不出混合有什么依据，
如果不混，工作量好大，结果太差还不能进行分析处理，郁闷中............要毕业啊，惨
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6楼2009-11-06 17:18:07
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germ2010

木虫 (正式写手)

Sustainability
引用回帖:
Originally posted by cato8163 at 2009-11-6 17:14:
小可，最近也想做PR-PCR，针对你的情况，小可认为不可取。有些时候，确实处理间差异比重复间还大。在重复时，设计最少3个。最好是4个了，如果有1个偏差太大，是可以舍去的。虽然成本高了，但实验结果是可信的。
...

谢谢您的指教，最好当然是不混合，但是，要毕业啊，要数据啊，郁闷..........
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7楼2009-11-06 17:21:33
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